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WB 滤纸产品组合
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试用说明
1、试用品规格：GB005 滤纸和 3MM 滤纸； 2、运费： 包邮 ； 包邮； 3、联系时间： 试用活动结束后的7天内； 4、申请要求： 每个收件地址（接收人）限申请一份；； 5、其他说明： 收到样品申请后会电话联系，请留意接收来电；
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产品属性
在WB 实验转印过程中，膜和滤纸都是一个非常重要的载体。别看他们只是一张纸，可是对于整个实验也是有着举足轻重的关键作用！那么对于各种蛋白，要怎么选择转印方法呢？滤纸和膜，又需要怎么选择呢？（关于膜的选择，请移步：WB转印膜产品组合）
对于大分子量蛋白，建议采用湿转，但是转印速度较慢并需要大量的缓冲液。为了得到清晰、尖锐的条带，获取高质量的转印效果，优先选择湿转，次选半干法转印。在湿转过程中，大量缓冲液会升温，温度升高会导致蛋白质不可逆地变性。因此，使用冷却缓冲液并保持低温非常重要， 许多商品化湿传系统可连接到恒温循环水浴。另一个常见的过程是在4°C环境下进行整个湿转实验，比如在冰箱中。
♦ 进行电转时，确保在将凝胶涂敷到膜上时不形成气泡。气泡会导致膜上没有蛋白质转移的空白点。
♦ 可使用预冷的转印缓冲液，可避免转印中系统过热。
♦ 如果无法确认组装三明治或连接电源是否正确，请预先在凝胶两侧放一张膜，避免丢失蛋白。彩色marker将帮助您确定蛋白转移至哪张膜上！小分子蛋白可穿透转印膜，因此可同时使用两张膜转印小分子蛋白。
转印缓冲液作为导电介质，其中蛋白质是可溶的，它不应影响蛋白质与膜的结合。取决于缓冲液的pH，蛋白转移可以朝向阴极(-)或朝向阳极(+)。此外，分子与膜的结合力受缓冲液特性(如盐类型和浓度)、甲醇浓度以及洗涤剂(如SDS)存在的影响。
♦ 如果转印缓冲液和电泳缓冲液不同，则凝胶在转印之前应放入转印缓冲液中进行平衡，以确保凝胶接触膜之前发生任何膨胀或收缩。该步骤的省略可能导致条带变形或条带分辨率降低。 大多数转印缓冲液中含有甲醇。为了实现蛋白分子与膜，尤其是硝化纤维素膜(6)的有效结合，甲醇的加入是必要的。去除可与蛋白质结合的SDS，可提高分子与膜的结合力。然而，甲醇可能造成凝胶收缩，进而导致蛋白质洗脱率降低。这种效应在大分子量蛋白的转移中更为明显。因此，对于大分子蛋白的转移，建议使用低浓度的甲醇并在转印之前进行较长时间的平衡。
♦ 长期储存后，含有甲醇的缓冲液会变质——在转印之前加入甲醇。
♦ 应选用分析级甲醇，低级甲醇含有金属污染物，污染物将会沉积在电极上。 SDS对蛋白质与膜的结合是不利的，通过平衡15至30分钟，所有剩余的SDS应该在转印之前从凝胶中除去。然而，如果大分子蛋白难溶，或含有过量的疏水性氨基酸，那么需要在转印缓冲液中加入少量的SDS(0.02%至0.1%)。
♦ 如果样品洗脱速率缓慢，则需要较长的转印时间。如果蛋白结合不充分，可尝试不同的缓冲液。 乙醇可以代替甲醇，且更环保。 最广泛使用的蛋白转印缓冲液是经典的Towbin缓冲液。（192mM甘氨酸，25mMTris，20%甲醇[V/V]）。
Towbin和Laemmli缓冲液的pH值通常为8.3左右，不应该用酸或碱来调节。这将导致导电性问题，这会严重破坏实验及损坏设备。
♦ 转印缓冲液中加入0.1%的SDS以增强大分子蛋白的溶解度，加入20%的甲醇以增强膜的结合力。
♦ 分两阶段进行转印（仅用于湿转）。在低电流(1mA/cm2)下转印1小时，从而帮助蛋白在膜上的停留时间更长， 可以改善小分子蛋白的结合。为了转移较大分子蛋白，再加第二阶段的较高电流（3.5至7.5mA/cm2）。
♦ 转印后对凝胶进行染色，验证所有蛋白是否完全洗脱。通过预染marker监测到转膜效率。此外，可使用丽春红等可逆染色剂对膜染色进行验证。
♦ 在凝胶的阴极(-)方向放置一张转印膜，以检测组蛋白、核蛋白等带正电的蛋白。此方法需变性胶在无SDS的缓冲液中增加平衡时间，或使用非变性胶，方法仅适用于转膜蛋白的等电点高于缓冲液的pH的情况下。
♦ 放两张转印膜以捕获穿过第一张膜的小分子蛋白 现提供 Cytiva GB005 滤纸和 3MM 滤纸试用，有需要的同学可以联系 Cytiva 店铺申请试用。
滤纸选购指南如下：
订购货号：
Whatman 3MM 印迹滤纸
Whatman 17Chr 印迹滤纸
• Amersham“ 三明治 ” 印迹膜 / 滤纸组合，每组含 1 张印迹膜与 2 张 3MM 印迹滤纸
对于大分子量蛋白，建议采用湿转，但是转印速度较慢并需要大量的缓冲液。为了得到清晰、尖锐的条带，获取高质量的转印效果，优先选择湿转，次选半干法转印。在湿转过程中，大量缓冲液会升温，温度升高会导致蛋白质不可逆地变性。因此，使用冷却缓冲液并保持低温非常重要， 许多商品化湿传系统可连接到恒温循环水浴。另一个常见的过程是在4°C环境下进行整个湿转实验，比如在冰箱中。
♦ 进行电转时，确保在将凝胶涂敷到膜上时不形成气泡。气泡会导致膜上没有蛋白质转移的空白点。
♦ 可使用预冷的转印缓冲液，可避免转印中系统过热。
♦ 如果无法确认组装三明治或连接电源是否正确，请预先在凝胶两侧放一张膜，避免丢失蛋白。彩色marker将帮助您确定蛋白转移至哪张膜上！小分子蛋白可穿透转印膜，因此可同时使用两张膜转印小分子蛋白。
转印缓冲液及转印条件
转印缓冲液作为导电介质，其中蛋白质是可溶的，它不应影响蛋白质与膜的结合。取决于缓冲液的pH，蛋白转移可以朝向阴极(-)或朝向阳极(+)。此外，分子与膜的结合力受缓冲液特性(如盐类型和浓度)、甲醇浓度以及洗涤剂(如SDS)存在的影响。
♦ 如果转印缓冲液和电泳缓冲液不同，则凝胶在转印之前应放入转印缓冲液中进行平衡，以确保凝胶接触膜之前发生任何膨胀或收缩。该步骤的省略可能导致条带变形或条带分辨率降低。 大多数转印缓冲液中含有甲醇。为了实现蛋白分子与膜，尤其是硝化纤维素膜(6)的有效结合，甲醇的加入是必要的。去除可与蛋白质结合的SDS，可提高分子与膜的结合力。然而，甲醇可能造成凝胶收缩，进而导致蛋白质洗脱率降低。这种效应在大分子量蛋白的转移中更为明显。因此，对于大分子蛋白的转移，建议使用低浓度的甲醇并在转印之前进行较长时间的平衡。
♦ 长期储存后，含有甲醇的缓冲液会变质——在转印之前加入甲醇。
♦ 应选用分析级甲醇，低级甲醇含有金属污染物，污染物将会沉积在电极上。 SDS对蛋白质与膜的结合是不利的，通过平衡15至30分钟，所有剩余的SDS应该在转印之前从凝胶中除去。然而，如果大分子蛋白难溶，或含有过量的疏水性氨基酸，那么需要在转印缓冲液中加入少量的SDS(0.02%至0.1%)。
♦ 如果样品洗脱速率缓慢，则需要较长的转印时间。如果蛋白结合不充分，可尝试不同的缓冲液。 乙醇可以代替甲醇，且更环保。 最广泛使用的蛋白转印缓冲液是经典的Towbin缓冲液。（192mM甘氨酸，25mMTris，20%甲醇[V/V]）。
Towbin和Laemmli缓冲液的pH值通常为8.3左右，不应该用酸或碱来调节。这将导致导电性问题，这会严重破坏实验及损坏设备。
针对大分子蛋白 (分子量> 10kDa)
♦ 配胶时使用低浓度丙烯Xian An
从凝胶到膜的蛋白转移可以放缓，如同跑胶时蛋白缓慢迁移。如果转印大分子蛋白，电泳胶需降低聚丙烯Xian 浓度。低密度凝胶很脆弱，须小心处理。♦ 多一点SDS，少一点甲醇
大分子蛋白质会沉淀在胶中，提高转印难度。将最终浓度0.1%的SDS添加到转印缓冲液中，将有效避免上述情况。此外，甲醇削弱了SDS与蛋白质之间的相互作用，因此将甲醇减少到10%或更少，将减少蛋白沉淀的风险。♦ 选择湿转
...并且降低转印速度，通过降低电压或电流，增长转印时间。此外，在4°C进行转印有助于缓解产热的影响， 例如凝胶变形。
针对小分子蛋白 (分子量< 10kDa )
♦ 转印缓冲液中不加SDS
SDS阻碍了小分子蛋白与膜的结合♦ 甲醇浓度控制在20%
可去除SDS，并提高转印效率监测并优化转印方法
上述湿转和半干转的标准方法适用于大多数转印实验，如果转印中出现问题，可尝试以下步骤：♦ 转印缓冲液中加入0.1%的SDS以增强大分子蛋白的溶解度，加入20%的甲醇以增强膜的结合力。
♦ 分两阶段进行转印（仅用于湿转）。在低电流(1mA/cm2)下转印1小时，从而帮助蛋白在膜上的停留时间更长， 可以改善小分子蛋白的结合。为了转移较大分子蛋白，再加第二阶段的较高电流（3.5至7.5mA/cm2）。
♦ 转印后对凝胶进行染色，验证所有蛋白是否完全洗脱。通过预染marker监测到转膜效率。此外，可使用丽春红等可逆染色剂对膜染色进行验证。
♦ 在凝胶的阴极(-)方向放置一张转印膜，以检测组蛋白、核蛋白等带正电的蛋白。此方法需变性胶在无SDS的缓冲液中增加平衡时间，或使用非变性胶，方法仅适用于转膜蛋白的等电点高于缓冲液的pH的情况下。
♦ 放两张转印膜以捕获穿过第一张膜的小分子蛋白 现提供 Cytiva GB005 滤纸和 3MM 滤纸试用，有需要的同学可以联系 Cytiva 店铺申请试用。
滤纸选购指南如下：
| 转印滤纸选择指南 | ||||
| 品名 | 3MM 纸 | 17Chr 纸 | GB003 纸 | GB005 纸 |
| 厚度 | 0.34mm | 0.92mm | 0.8mm | 1.5mm |
| 毛细流速 | 130mm/30min | 190mm/30min | 略 | 略 |
| 吸水量 | 185mg/cm2, 适 中 | 高 | 较大 | 极大 |
| 推荐应用 | 全球标准纸用与电泳杂交 | 半干转印 | 普通凝胶转印 | 半干转印 |
| 成像方式 | 荧光或化学发光胶片或CCD成像仪 | |||
订购货号：
Whatman 3MM 印迹滤纸
| 3030-866 | 3MM 滤纸 8*10 英寸 | 100 张 |
| 3030-704 | 3MM 滤纸 27cm*100m | 1 卷 |
| 3030-681 | 3MM 滤纸 15cm*100m | 1 卷 |
| 3030-675 | 3MM 滤纸 12.5cm*100m | 1 卷 |
| 3030-861 | 3MM 滤纸 20*20cm | 100 张 |
| 3030-917 | 3MM 滤纸 46*57cm | 100 张 |
| 3030-153 | 3MM 滤纸 15*17.5cm | 100 张 |
| 3030-6461 | 3MM 滤纸 26*41cm | 100 张 |
| 3030-6185 | 3MM 滤纸 11*14cm | 100 张 |
| 3030-221 | 3MM 滤纸 18*34cm | 100 张 |
| 3030-6132 | 3MM 滤纸 12*14cm | 100 张 |
| 3030-6189 | 3MM 滤纸 4*5.25 英寸 | 100 张 |
Whatman 17Chr 印迹滤纸
| 3017-915 | 17Chr 滤纸 46*57cm | 100 张 |
| Whatman GB 印迹滤纸 | ||
| 10426981 | GB005 滤纸 200*200mm | 25 张 |
| 10427818 | GB003 滤纸 200*200mm | 100 张 |
| 10427813 | GB003 滤纸 160*180mm | 100 张 |
| 10427812 | GB003 滤纸 150*200mm | 100 张 |
• Amersham“ 三明治 ” 印迹膜 / 滤纸组合，每组含 1 张印迹膜与 2 张 3MM 印迹滤纸
| 10600122 | PVDF 0.2μm/3MM 80*90mm | 10 张 |
| 10600121 | PVDF 0.45μm/3MM 80*90mm | 10 张 |
| 10600110 | PVDF 0.45μm/3MM 140*160mm | 10 张 |
| 10600116 | PT 0.1μm/3MM 80*90mm | 10 张 |
产品属性
货号： 滤纸产品组合
品牌：Cytiva
