此前参加了BD公司在上海开的一个交流会议，感触比较多。加上自己最近刚开始接触流式，也遇到了很多困难，这一路走来也比较艰辛，所以特地把自己最近得到的一点点常识跟新手们分享一下，也希望高手们多给点建议。

一般情况，我们开始流式实验时，首先要选择抗体，必然要涉及到荧光的选择，尽量使这些荧光的补偿值降到最低。

1，我们需要了解我们用的流式细胞仪的硬件设施（激光，滤光片）

2，选择合适的荧光染料，尽量利用到你的仪器上的所有激光，这样可以使这些荧光交叉可能性达到最小。一般四种颜色或以下的比较好选，常用：FITC,PE,APC,Percp-cy5.5。当然还有其他很多种组合 我们也可以用BD或ebioscience网站上的软件进行选择http://www.bdbiosciences.com/research/multicolor/spectrum_viewer/index.jsp http://www.ebioscience.com/resources/fluorplan-spectra-viewer.htm 界面有点不同，但基本原理就是设置好你需要集中颜色，用的是哪台仪器，几根激光。。。软件就会自动列出合适的染料。

3，选择好荧光染料以后，就是将这些染料与你的抗体联系起来，这就要根据自己实验的需要了，有些常用的抗体上可能标记有很多种染料，但有些不常用的选择性就不太多，所以可以先定一些无法选择的抗体，然后就是根据表达量少的标记荧光信号强的染料，认为重要的抗体标记荧光信号强的，常用荧光的强弱如下：PE>APC>PE-CY7>Percy-cy5.5>FITC>APC-CY7。

4，抗体确定好后，就可以开始预实验了：包括样品的处理，抗体的浓度，时间，这些都需要一定的try。

5，正式开始实验需要做blank/isotype,单染（两两调补偿），复染（sample）。

关于抗体选择我还有个疑问，有个师姐将最好不好将PE-CY5和APC一起染，因为CY5可以被633激发，而我因为之前选抗体的时候不太懂，所以正好选了这两个，单染做出来的补偿还可以。有必要换抗体吗？

原文链接：http://immunotech.dxy.cn/bbs/topic/22284759?from=recommend&mode=old