说起流式细胞术
有一种应用叫做细胞免疫分型分析
表面抗原or胞内/核内抗原
检测胞内/核内抗原时，破膜是必不可少的一环
为 何 要 破 膜 ？
正常情况下，荧光标记的抗体无法通过完整的细胞膜进入细胞内，因而无法检测胞内抗原。破膜，就是利用破膜剂破坏细胞膜的完整性，给细胞膜打上足够大的孔，使抗体可以进入细胞内，进而特异性结合目的蛋白。
何 为 破 膜 剂 ？
通常所说的破膜剂包括固定剂（如多-聚-甲-醛，固定细胞膜）和去污剂（如皂素、Tween-20和Triton-x等，给细胞膜打孔）。相对于Tween-20和Triton-x，皂素的破膜会更温和一些，破膜过程是可逆的，能保证膜表面抗原的完整性，但不可破核膜。
破 膜 剂 应 用 — 胞 内 抗 体 染 色
1. 制备好细胞悬液，取100 μl（全血样本：人100 μl，小鼠30~50 μl）染表面抗体，室温避光孵育15 min，不用洗涤；
2. 加入100 μl FIX&PERM MEDIUM A固定剂，室温孵育15 min；
3. 加入3 ml流式染色缓冲液，300 g离心5 min，弃上清，涡旋振荡，使残留液体混匀沉淀；
4. 加入100 μl FIX&PERM MEDIUM B破膜剂和胞内抗体（和/或相应的同型对照），室温避光孵育15 min；
5. 加入3 ml流式染色缓冲液，300 g离心5 min，弃上清收集细胞；
6. 用500 μl 流式染色缓冲液重悬细胞，上机检测并分析。
注意：如不能立即检测，用0.5 ml 0.1%~4%多-聚-甲-醛重悬，4℃避光保存，24 h内上机分析。
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产品名称 |
规格 |
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560 |
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| 100T |
1060 |
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| 200T |
1960 |
备注：破膜剂包含A液和B液两种组分，可将细胞固定、减少对表面抗原的影响，并增加细胞膜的通透性，使荧光素标记的抗体可通过细胞膜与抗原结合。同时B液还可高效裂解红细胞，无需另外处理，减少对细胞的影响。
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