在构建表达载体的时候 ，我们要如何选择合适自己实验需要的载体呢？载体可分为病毒载体和非病毒载体，病毒载体又分为慢病毒载体、腺病毒载体和腺相关病毒载体等。下面来说说病毒载体中的慢病毒载体。

一、慢病毒

 

逆转录病毒（Retrovirus）：是一种RNA病毒，在复制时需在逆转录酶的作用下首先将RNA转变为cDNA， 再在DNA复制、转录、翻译等蛋白酶作用下扩增。主要包括RNA肿瘤病毒、慢病毒及泡沫病毒等三种亚科。

 

慢病毒（Lentivirus）：属于逆转录病毒科，名称源自该种病毒长达数年的潜伏期。

 

zui经典的慢病毒是由HIV病毒改造而来，而且HIV-1/HIV-2系统也得到了广泛的应用，除了HIV病毒系统以外，后续还有猿类免疫缺陷病毒（simian immunodeficiency virus, SIV）载体系统、猫免疫缺陷病毒（felines immunodeficiency virus, FIV）载体系统、绵羊梅迪-维斯纳病毒（MMV）载体系统和马传染性贫血(EIA）载体系统等。

 

慢病毒的优势：

 

1.慢病毒携带的基因组可整合到宿主基因组，使宿主细胞长时间稳定表达外源基因；

2.可感染分裂和非分裂细胞；

3.低免疫原性，直接注射活体组织不易造成免疫反应，适用于动物实验；

4.可以更换特异性启动子；

5.野生型的HIV大小约为9.8 kb，插入片段可长达5-6 kb；

 

二、慢病毒载体

 

慢病毒载体（Lentivirus）是一类改造自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒载体，是逆转录病毒的一种，基因组是RNA，其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒。可利用逆转录酶将外源基因整合到基因组中实现稳定表达，具有感染分裂期与非分裂期细胞的特性。

慢病毒载体的优势：

 

（1）表达时间长：慢病毒可将外源基因整合到宿主细胞基因组上，实现基因长时间稳定的表达，不随细胞分裂传代而丢失，是细胞实验的推荐，常用于构建稳转株。

（2）安全性高：未发现致病性，慢病毒载体改造T细胞用于CAR-T细胞治疗。

（3）免疫原性低：直接注射活体组织不易造成免疫反应，适用于动物实验。

 

三、应用

 

基因治疗；转基因动物；基因敲除；药物研究；慢病毒载体能够有效地感染培养的肿瘤细胞、肝细胞、心肌细胞、神经元、内皮细胞、干细胞等多种类型原代细胞和大部分细胞系；慢病毒的感染具有整合特性，能够将外源基因有效地整合到宿主染色体上，因而可以达到持久性表达，从而构建稳转细胞株，用于基因的细胞功能研究；快速建立生产目的蛋白的细胞系，非常有前途的真核表达方法。

 

慢病毒载体（ORF、启动子、shRNA）：ORF表达克隆，shRNA克隆，miRNA前体表达克隆，miRNA inhibitor克隆，启动子报告克隆，CRISPR-Cas9相关克隆均可构建。

 

Cas9 核酸酶纯化 Lentifect 慢病毒颗粒：Cas9核酸酶克隆表达按照人类密码子优化过的Cas9核酸酶基因。Cas9切口酶克隆表达一个Cas9 D10A 切口酶基因。该切口酶是一个Cas9突变体，第10位氨基酸从野生型的天冬氨酸突变成了丙氨酸。

 

细胞永生化试剂：原代细胞经过一定数量的增殖，和一定次数的分裂后达到复制衰老的状态，从而限制了衰老或受损细胞的增殖。GeneCopoeia提供细胞永生化试剂，利用重组慢病毒携带基因，如simian virus 40 (SV40)大T抗原和人端粒酶逆转录酶蛋白(hTERT)诱导永生化，可显著延长原代细胞的寿命。

 

慢病毒包装试剂盒：Lenti-Pac™ HIV 表达包装系统包括优化的慢病毒包装质粒，eGFP阳性对照质粒，EndoFectin™转染试剂，增加病毒产量的TiterBoost™滴度增强剂。该系统与GeneCopoeia的ORF、shRNA、miRNA及Promoter克隆配套使用保证更高滴度和更高表达水平。

 

慢病毒浓缩试剂盒：Lenti-Pac™ 慢病毒浓缩试剂是GeneCopoeia为用户设计的用于快速、简便浓缩慢病毒颗粒的慢病毒浓缩试剂。实验操作时只需将浓缩试剂与需浓缩的慢病毒上清液混合，经短暂孵育，普通离心机离心即可。

 

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