1.对于合成高难度的基因,需要如何解决的?
高低GC,重复结构 | 使用像酶切链接、多段重组等方式,分成小段,来降低结构对合成的影响。 |
序列较长 | 使用多端重组的方式来构建,体外组装与体内组装相结合。 |
特殊载体元件 (如CCDB等) |
根据不同的特殊元件更换相对应的特定感受态细胞。 |
其他不可预测的难度 (如有毒性) |
尝试不同的感受态细胞 |
- 在大肠杆菌表达系统中,哪种终止密码子具有偏好性?
- 在哺乳动物表达系统中,哪种终止密码子具有偏好性?
- 什么是密码子偏好性?
- 什么是密码子优化?
通常情况下,CAI < 0.80被认为需要进行密码子优化。
- 什么是CAI?
- COA中酶切验证的酶切位点的选择标准是什么?
- 移码现象是什么?在设计基因合成或亚克隆方案时如何避免移码?
- 酶切位点的选择,如NcoI(CCATGG),因为其含有一个起始密码子,所以很容易发生移码现象,因此,在使用这类酶切位点时应慎重,可以添加移码保护碱基;
- 尽量利用载体上已有的序列。
- 什么类型载体的亚克隆难度比较大?
- 基因合成的成功率主要由什么决定?我们需要考虑哪些因素?
主要因素包括:
- 整体GC含量过低(低于20%)或过高(高于80%);
- DNA序列中的各种GC含量;
- 均聚物(如polyA);
- 重复序列长度≥20bp;
- 小重复序列的个数以及长度;
- 是否含有回文序列;
- 甲基化现象是什么?
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