资讯

ELISA 的样本前处理和操作需要注意的细节

2021-09-10 18:05

在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本,及时储存在 4℃备用。对于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用,有条件的,最好-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。

 液体类标本:  包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

1. 血清:
室温血液自然凝固 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右(2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2. 血浆:
应根据标本的要求选择 EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右(2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
3. 尿液:
用无菌管收集。离心 20 分钟左右(2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右(2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。
5. 培养细胞
检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右(2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6. 
 
组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂 , 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心 20 分钟左右(2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

1,对于样本要求保持鲜重
2,称取样本中的重量不小于 50mg,一般以 1g 为基准
3,匀浆的比例选取 10%,相当于 1g 组织加 9ml 的匀浆液来进行匀浆
4,匀浆液选取 PBS(PH=7.2-7.4,浓度为 0.01mol/L)
选用组织匀浆器或者碾钵进行组织匀浆!

注意事项

1、要保证移液抢的准确性,误差不能超过 2%。可用水和电子天平进行确定。但最好有专业人员进行矫正。
2、要配备 20ul、50ul、100ul、1000ul 和排枪各一支。吸取不同的液体后,要更换枪头。即使是吸取标准品时。
3、要在实验前 1 小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定。
4、实验时,要使底物避光保存。
5、用 * 吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
6、吸取液体时,要用量程和需要量接近的 * 去吸,减少误差。
7、将液体加到酶标孔中时,避免 * 头和孔内液体接触,可使 * 头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
8、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动 30 秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
9、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
10、洗板时,每次洗液加入后,应静置 1 分钟,使清洗更加彻底。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
11、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制 PH7.4,0.02M 的磷酸缓冲液,加入 0.1% 的吐温 20 作为洗液。加入 1/1000 的叠氮钠后可长期保存。
12、底物是光敏感的,要在临用前现配。
13、检测前,要打开酶标仪,使之稳定 10 分钟以上。
14、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。
15、待检样品要澄清,否则会影响结果。
16、温浴时间应遵守试剂盒规定。
17、应尽量做双孔实验,这样才能保证数据的准确性。
18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
 
来源:上海臻科生物科技有限公司 点击量:

扫码关注「实验菌」,入科研社群,领学习资源

更有优质直播、研选好物、福利活动等你来!

评论

商家推荐

ATP酶试剂盒(测细胞膜、线粒体、微粒体等的Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶,样本前处理需高速离心)(比色法)

询价

AD系列•全自动样本前处理仪(6~12块板)

询价

ATP酶试剂盒(测细胞膜、线粒体、微粒体等的Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶,样本前处理需高速离心)(比色法)

询价

甲基化检测样本前处理试剂盒(一步法)

¥1100 - 1300

ATP酶试剂盒(测细胞膜、线粒体、微粒体等的Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶,样本前处理需高速离心)(比色法)

询价

ATP酶测试盒(测普通组织匀浆的 Na+K+、Ca2+Mg2+ATP酶,样本前处理不需高速离心)

询价

Bioruptor Pico二代测序与ChIP样本前处理

¥1

ATP酶试剂盒(测细胞膜、线粒体、微粒体等的Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶,样本前处理需高速离心)(比色法)

¥350

宿主细胞残留DNA(磁珠法)样本前处理试剂盒

¥4400

ATP酶试剂盒(测细胞膜、线粒体、微粒体等的Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶,样本前处理需高速离心)(比色法)

¥0
咨询商家