Q: 冷冻管应如何解冻？

A: 取出冷冻管后，装入小自封袋后立即放入 37°C 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在 1 - 2 分钟内全部融化，并注意冷冻管盖沿不要见水，避免污染。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。
 

Q: 细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除 DMSO？

A: 除少数特别注明对 DMSO 敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有 10 - 15 ml 新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除 DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。

Q: 如何用台盼兰计数活细胞？

A: 用无血清培养基把细胞悬液稀释到 200～2000 个/毫升，在 0.1 毫升的细胞悬液中加入 0.1 毫升的 0.4% 的 台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。

Q: 培养细胞时应使用 5% 或 10%CO2？或根本没有影响？

A: 一般培养基中大都使用 HCO3 -/CO32 -/H+作为 pH 的缓冲系统，而培养基中 NaHCO3 的含量将决定细胞培养时 应使用的 CO2 浓度。当培养基中 NaHCO₃含量为每公升 3.7 g 时，细胞培养时应使用 10% CO2；当培养基中 NaHCO3 为每公升 1.5 g 时，则应使用 5% CO2 培养细胞。

Q:DMSO 的等级和无菌过滤的方法？

A: 冷冻保存使用的 DMSO 等级应为 Tissue culture grade (如 SigmaD2650) 无菌级别，第一次开瓶后应当立即少量分装于无菌试管中，并保存于室温。避免反复冻融而造成 DMSO 裂解释放出有害物质，同时也可减少污染的机会。若要过滤 DMSO，则须使用耐 DMSO 之 Nylon 材质滤膜。

Q: 细胞冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？

A: 冷冻管内细胞数目一般为 1x10^6 cells/vial，融合瘤细胞则以 5x10^6 cells/vial 为宜。

Q: 支原体污染会对细胞培养有何影响？
A: 支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数，代谢及研究当中的任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为 mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。

Q: 当侦测出细胞株有支原体污染时，该如何处理？
A: 直接灭菌后丢弃，以避免污染其它细胞株。

Q: 各种细胞培养用的 dish，flask 是否均相同？
A: 不同品牌的 dish 或 flask，其所 coating 的 polymer 不同，制造程序亦不同，虽对大部分细胞没有太大之影响，惟少数细胞则可能因使用品牌不同之 dish 或 flask 而有显著之生长差异。

Q: 购买冷冻管细胞经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？
A: 研究人员在冷冻细胞培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。

Q: 购买细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？
A: 研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：(1) 培养基使用错误或培养基品质不佳。(2) 血清使用错误或血清的品质不佳。(3) 解冻过程错误，冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。(4) 悬浮细胞误认为死细胞。（5）温度使用错误，细胞置于–80°C 太久。

Q: 收到冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落的原因？
A: 冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，是因热胀冷缩物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染， 故冷冻管在放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。

Q:Hoechst 33258 与 Hoechst 33342 都能染核，二者区别是什么？

Hoechst 33342，也称 bisBenzimide H 33342 或 HOE 33342。分子式为 C27 H28N6O·3 HCl·3 H2O，分子量为 615.99。Hoechst 33258，也称 bisBenzimide H 33258 或 HOE 33258。分子式为 C25 H24N6O·3 HCl，分子量为 533.88 两种染料都是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。但是 Hoechst 33342 对细胞的毒性作用更小一些，33258 穿透能力较 33342 弱，染活细胞时容易被" 泵出"，也就是拒染。所以一般来说 Hoechst 33258 用于细胞固定后再染色，而 hoechst33342 则可以对活细胞直接进行染色。