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如何成为一个「T细胞活化实验」的「小天才」?

2021-02-09 22:34

激活 T 细胞的方法

众所周知,T 细胞的体外刺激是分为抗原特异性的T细胞刺激,和抗原非特异性的 T 细胞刺激

说到初始 T 细胞的激活,扩增和分化,相信大家都熟悉这两个需要的刺激信号。

第一个信号是由 T 细胞抗原识别受体 (TCR) 与和其相应的 MHC 配体结合后产生。因为单独连接 TCR 不会诱导 T 细胞完全活化,会导致无反应的状态,因此除了 TCR 之外,共刺激受体(如 CD28)还必须传递第二个信号,也就是支持信号。CD28 介导的共刺激与 TCR 信号协同作用,从而促进激活,扩增和分化。
       

除此之外,像 IL-2(第三信号)等细胞因子,也参与了T细胞刺激的和后期阶段。值得注意的是,激活强度还可以通过各种培养因素来调节,比如培养基的组成,细胞因子环境,培养方法和供体细胞。

让活化过程「精确可控」

在免疫基础研究中,通常我们所用来激活T细胞的方式是使用结合单克隆抗 CD3 和抗 CD28 的磁珠。然而为了满足一些实验需求,常常需要使用更加灵活的刺激 T 细胞的方法,对激活信号持续时间进行控制,来精确的控制信号的启动和中止

为了达到这一目的,IBA Lifesciences 研发了一种新型T细胞扩增方法 Streptamer®,以独特的灵活性脱颖而出,让活化过程「精确可控」。

他们使用了低亲和力的抗 CD3 和抗 CD28 的抗体 Fab 片段(非传统全长抗体),结合上 Twin-Strep-tag 亲和标签,形成 CD3 Fab-Strep 和 CD28 Fab-Strep。再结合非磁的可溶性蛋白聚体 Strep-Tactin®,在亲和力作用下,即可与 TCR 和 CD28 共刺激受体多价结合,来传递激活信号了。

 
 

这种方法的优点,除了用于刺激的试剂是非磁性的可溶蛋白复合物外,还有通过简单的加入 biotin即可以移除刺激试剂,达到精确掌控活化时间的目的。

当然,也可以根据实验需求,调整 CD3:CD28 Fab-Strep 的比例;或是使用预混好的 CD3:CD28 Premix,操作更方便。
(实验流程)

原理介绍了这么多,让我们看一下 Streptamer® 的实际使用数据吧:
 
  • 使用 CD3/CD28 Streptamer® premix 试剂扩增 T 细胞
   
(使用 CD3/CD28 Streptamer® 扩增经 CD3 Fab Streptamer® Isolation Kit MB (6-8000-201) 分离得到的 CD3+ 人 T 细胞,13 天后,测量细胞的扩增倍数。)
 
  • 显微镜下观察培养中的 T 细胞,发现经 Streptamer® 细胞扩增试剂活化后,第三天即形成细胞群
 
 
(使用 (左),未使用 (右) CD3/CD28 Streptamer® 扩增经 CD3 Fab Streptamer® Isolation Kit MB (6- 8000-201) 分离得到的 CD3+ 人 T 细胞。)
 
  • T 细胞在经 Streptamer® 试剂诱导活化后,检测细胞表面活化标记 CD25 和 CD69
      
(使用 CD3/CD28 Streptamer®扩增经CD3 Fab Streptamer® Isolation Kit MB (6-8000-201) 分离得到的 CD3+ 人 T 细胞 6 天。使用流式细胞仪检测 CD3+ T 细胞的活化标记 CD25 和 CD69。死细胞已使用 DAPI 染色排除。)
  • 使用 CD3/CD28 Streptamer® 试剂后,T 细胞的活化增殖情况
 
(使用 CD3/CD28 Streptamer® 扩增经 CD3 Fab Streptamer® Isolation Kit MB (6-8000-201) 分离得到的 CD3+人 T 细胞,使用 CFSE 染色并在 48 孔培养板中培养 5 天。在含 CD4+T 细胞 (上图)或 CD8+ T 细胞(下图)中, 用流式细胞仪测量细胞的增殖。死细胞已使用 PI 染色排除。)
 
Streptamer® 的优点总结
  • 溶解性
  • 易用性
  • 对激活信号的时间控制
  • 可逆性
当然,除了以上优点外,经济实惠也是 CD3/CD28 Streptamer 获得大家青睐的原因之一,想了解更多就快来咨询吧!咨询多多,实惠多多哦~

产品列表
 
来源:德国IBA Lifesciences 点击量:

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