1、仪器和色谱条件建立
1.1 仪器 超高压液相色谱三重四级杆串联质谱或高分辨质谱，配备电喷雾离子源。
1.2 色谱质谱调节建立药物及其代谢物的分析方法。确定液相色谱条件和质谱条件，提供相应的优化参数。
2、对照品和试剂
2.1 对照品 对照品采购地点和批号。
2.2 甲醇、乙腈为质谱级溶剂。
3、方法学确证
3.1 空白血浆加标样品处理与测定
取空白基质人血浆样品加入外源性药物和代谢物，测定药物和代谢物的浓度。
3.2 专属性实验
在优化的实验条件下，对空白血清、加标空白血清和受试者血清药物浓度进行测定，确定血浆中的内源性杂质不干扰样品测定。提供受试者的空白血清样本、空白血浆加标及受试者服用受试制剂后的血清样品中外源性药物和代谢提取离子流图对比。
3.3 标准曲线的建立
用健康人空白血浆配置 6 个不同浓度药物和代谢物的标准品溶液，以样品和内标峰面积比 As/Ais 为纵坐标，浓度 Con.( µg/ml) 为横坐标，可加入适当权重系数进行回归，得血清中药物和代谢物标准曲线，提供各组分的标准曲线和线性范围。预期可满足本研究中药物和代谢物在人体内生物等效性研究。
3.4 定量下限确定
空白加标对药物和代谢物进行测试。能检测出 Cmax 的 1/10～1/20 时的药物浓度作为本测定方法的定量下限。提供定量下限值。
3.5 精密度试验
空白加标分别配置为高中低三个浓度。测定批内变异和批间（连续考察三天）变异。批内和批间变异均小于 15% 以内，符合生物样品分析要求。
3.6 准确度试验
空白加标分别配置为高中低三个浓度。测定结果代入血清标准曲线算出测定浓度，将测定浓度与加入浓度相比，算得相对回收率。各浓度的相对回收率均符合生物样品分析要求（80%～120%）。
3.7 绝对回收率
空白加标分别配置为高中低三个浓度，测定结果的峰面积与相同浓度标准品溶液直接进样的峰面积相比，算得绝对回收率。提供绝对回收率值。
3.8 样品的稳定性
空白加标分别配置为高中低三个浓度。进行室温稳定性试验（20℃ 分别放置 0 和 4 h）、处理后稳定性试验（4℃ 放置 0 和 24 h），将测定结果的峰面积比代入血浆标准曲线计算实测值，提供稳定性试验结果。
3.9 介质效应试验
取空白血浆前处理制得空白介质。用空白基质配置标准曲线。计算测得的介质中药物峰面积和相同浓度药物标准品溶液的峰面积比，评价介质对测定的影响。
1.1 仪器 超高压液相色谱三重四级杆串联质谱或高分辨质谱，配备电喷雾离子源。
1.2 色谱质谱调节建立药物及其代谢物的分析方法。确定液相色谱条件和质谱条件，提供相应的优化参数。
2、对照品和试剂
2.1 对照品 对照品采购地点和批号。
2.2 甲醇、乙腈为质谱级溶剂。
3、方法学确证
3.1 空白血浆加标样品处理与测定
取空白基质人血浆样品加入外源性药物和代谢物，测定药物和代谢物的浓度。
3.2 专属性实验
在优化的实验条件下，对空白血清、加标空白血清和受试者血清药物浓度进行测定，确定血浆中的内源性杂质不干扰样品测定。提供受试者的空白血清样本、空白血浆加标及受试者服用受试制剂后的血清样品中外源性药物和代谢提取离子流图对比。
3.3 标准曲线的建立
用健康人空白血浆配置 6 个不同浓度药物和代谢物的标准品溶液，以样品和内标峰面积比 As/Ais 为纵坐标，浓度 Con.( µg/ml) 为横坐标，可加入适当权重系数进行回归，得血清中药物和代谢物标准曲线，提供各组分的标准曲线和线性范围。预期可满足本研究中药物和代谢物在人体内生物等效性研究。
3.4 定量下限确定
空白加标对药物和代谢物进行测试。能检测出 Cmax 的 1/10～1/20 时的药物浓度作为本测定方法的定量下限。提供定量下限值。
3.5 精密度试验
空白加标分别配置为高中低三个浓度。测定批内变异和批间（连续考察三天）变异。批内和批间变异均小于 15% 以内，符合生物样品分析要求。
3.6 准确度试验
空白加标分别配置为高中低三个浓度。测定结果代入血清标准曲线算出测定浓度，将测定浓度与加入浓度相比，算得相对回收率。各浓度的相对回收率均符合生物样品分析要求（80%～120%）。
3.7 绝对回收率
空白加标分别配置为高中低三个浓度，测定结果的峰面积与相同浓度标准品溶液直接进样的峰面积相比，算得绝对回收率。提供绝对回收率值。
3.8 样品的稳定性
空白加标分别配置为高中低三个浓度。进行室温稳定性试验（20℃ 分别放置 0 和 4 h）、处理后稳定性试验（4℃ 放置 0 和 24 h），将测定结果的峰面积比代入血浆标准曲线计算实测值，提供稳定性试验结果。
3.9 介质效应试验
取空白血浆前处理制得空白介质。用空白基质配置标准曲线。计算测得的介质中药物峰面积和相同浓度药物标准品溶液的峰面积比，评价介质对测定的影响。
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