质粒宿主：大肠杆菌、哺乳细胞、酵母菌、乳酸菌等
质粒用途：基因模板
片段类型：cDNA
片段物种：小鼠
原核抗性：Amp
载体序列：TAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAA
ATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATA
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AAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTC
CTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGA
TAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACG
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GTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAAAGGCGGCACAACCCCAGTGCCACGTTGTGAGTTGGA
TAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTCCTCAAGCGTATTCAACAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGT
ATGGGATCTGATCTGGGGCCTCGGTACACATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCCCGAA
CCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAATATGGCCACAACCATGGTGAGCAAGGGCGCCGAGCTGTTC
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GGGCGATACCCTGGTGAATCGCATCGAGCTGACCGGCACCGATTTCAAGGAGGATGGCAACATCCTGGGCAATAAGATGG
AGTACAACTACAACGCCCACAATGTGTACATCATGACCGACAAGGCCAAGAATGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGC
CACAACATCGAGGATGGCAGCGTGCAGCTGGCCGACCACTACCAGCAGAATACCCCCATCGGCGATGGCCCTGTGCTGCT
GCCCGATAACCACTACCTGTCCACCCAGAGCGCCCTGTCCAAGGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGATCTACTTCG
GCTTCGTGACCGCCGCCGCCATCACCCACGGCATGGATGAGCTGTACAAGTCCGGACTCAGATCTCGAGCTGATCCAAAA
AAGAAGAGAAAGGTAGATCCAAAAAAGAAGAGAAAGGTAGATCCAAAAAAGAAGAGAAAGGTAGGATCCACCGGATCTAG
ATAGCGGCCGCGACTCTAGATCATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACC
TCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAA
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AACCATCACCCTAATCAAGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTT
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GAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAGA
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ACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTC
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CAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCAC
ATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCATGCAT
质粒图谱：
使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
上海圻明生物科技有限公司供应蛋白，多克隆抗体，单克隆抗体，重组蛋白等几万种，gibco血清大量现货、澳洲胎牛血清10099-141C、YMC-Pack ODS-A色谱柱 AA12S05-2546WT(4.6nm×250nm, 5μm)等大量现货供应。
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感受态细胞：克隆感受态细胞、表达感受态细胞、根瘤农杆菌感受态细胞、发根农杆菌感受态细胞、酵母感受态细胞、大肠杆菌质粒等。
elisa试剂盒：种属涵盖大鼠小鼠，人，兔，牛，鸡，犬等。提供免费代测。
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BM0404 GV3101(pSoup)感受态细胞
BM0405 GV3101(pSoup)电转感受态细胞
BM0406 GV3101(pSoup-p19)感受态细胞
BM0407 GV3101(pSoup-p19)电转感受态细胞
BM0408 EHA105(pSoup)感受态细胞
BM0409 AGL1(pSoup)感受态细胞
BM0410 GV3101（pJIC SA_Rep）感受态细胞
BM0411 Ar A4感受态细胞
BM0412 Ar A4电转感受态细胞
BM0413 Ar Qual感受态细胞
BM0414 Ar Qual电转感受态细胞
BM0415 MSU440感受态细胞
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BM0417 C58C1感受态细胞
BM0418 Ar 1193感受态细胞
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BM0429 Y190感受态细胞
Y190感受态细胞产品说明
基因型
MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyhr2, LYS2 : : GAL1
UAS-HIS3TATA-HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ
● 产品说明
Y190 菌株是 Clontech 公司开发的 GAL4 系统酵母双杂实验用菌株，MATa 型，可直接转化质粒或与 MATα 型酵母菌株 Y187通过 mating 操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker 为：trp1，leu2，cyh2；报告基因为：lacZ，HIS3，MEL1。Y190-GAL4 酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：(pGB 和 pACT2)或（pGBKT7 和 pGADT7）。质粒 pGB 由 pGBKT7改造而来，筛选标志为 TRP1，用于表达 DNA-BD(来自酵母转录因子 GAL4N 端 1~ 174 位氨基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒 ACT2 与 pGADT7 的结构和功能类似，筛选标志为 LEU，用于表达 AD(GAL4 C 端 768~881 位氨基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4 系统原理：一个完整的酵母转录因子 AL4 可分为功能上相互独立的两个结构域：位于 N 端 1~174位氨基酸区段的 DNA 结合域 (DNA-BD)和位于 C 端 768~881 位氨基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD 能够识别 GAL4-responsive gene 的上游激活序列 UAS，并与之结合。而 AD 可以启动 UAS 下游的基因进行转录。BD 和 AD 单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的 GAL4 活性，使含有 UAS 的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD 不与 AD 结合，将要检测的蛋白质分别与 BD 和 AD 融合，形成 bait 融合蛋白(bait –BD)和 prey 融合蛋白 (prey-AD)，如果 bait 和 prey发生相互作用，就会促使 BD 和 AD 的相互接近，形成完整的 GAL4，从而激活报告基因的转录。Y190 感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pGADT7 质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
● 操作方法
1. Carrier DNA 在每次使用前要通过加热处理使其变性为单链状态，步骤如下：Carrier DNA 放 95℃水浴或金属浴 3 min，快速插入冰中，静置 3 min，再次放 95℃水浴或金属浴 3 min，快速插入冰中，静置 3 min 以上。
2. 取 100 µl 冰上融化的 Y190 感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒 0.5-3 µg，Carrier DNA10 µl，PEG/LiAc 500 µl 并吸打几次混匀，30℃水浴 30 min (15 min 时翻转 6-8 次混匀)。
3. 将管放 42℃水浴 15 min (7.5 min 时翻转 6-8 次混匀)。
4. 5000 rpm 离心 40 s 弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s 弃上清。
5. ddH2O 50 µl 重悬，涂板，29℃培养 48-96 h。
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