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毛细管电泳技术在引物质控方向的应用

2020-01-13 17:50

毛细管电泳技术可应用于离子、化合物、蛋白、核酸、糖类以及细胞和病毒等物质的分离和分析,具有高效、快速、成本低、应用模式开放等显著优势。先多用于环境、食品和工业中的离子分析;药物成分分析和核酸蛋白分子产物检测等等。基于毛细管电泳技术研发的仪器很多,在核酸和蛋白检测方面,毛细管电泳技术正在逐渐替代传统平板凝胶电泳技术。

毛细管电泳与传统的平板凝胶电泳相比具有高分辨率、高速度、高自动化的优势。Qsep 系列毛细管电泳仪独特,就是基于毛细管电泳技术,巧妙的将电泳胶和染料预先混合,制作成成品检测耗材,结合激光诱导荧光检测器,可快速方便的进行核酸蛋白样本检测。可检测的样本非常广泛,例如:Oligo 引物的质量控制、PCR 产物检测、总 RNA 和 DNA 完整性质控、蛋白质-DNA 相互作用测定以及核酸适配体的筛选。

就引物质控来说,引物合成公司化学合成引物后通过 HPLC 仪器回收目的片段后进行冻干,后续还需要进行引物纯度检测。因为引物的主带和杂带分子量时间可能仅相差 1-2 和碱基,所以实验室一般采用 PAGE 方法进行纯度质控,整个质检过程比较繁琐复杂,先配置加有 7M 尿素的 16% 的聚丙.烯酰胺凝胶,取 0.2-0.5OD 的引物用尿素饱和液溶解后变性 95℃ 2 min 进行 600V 电压电泳,2-3 h 后,在紫外灯下检测带型,主带附近无杂带说明纯度高,条带不单一就要根据实际杂带亮度来判断是否需要重新合成。PAGE 电泳的整个过程耗时较长,且无法对主带和杂带进行定量分析,更多靠经验判断样本合格与否。有条件的单位可以采用毛细管电泳-质谱联用(CE-MS)技术来质检 Oligo 引物,不过质谱仪价位较高,用于引物质控会提高引物合成的成本,现有单位利用 Qsep 系列毛细管电泳仪进行 Oligo 纯度质控,分辨率灵敏度会显著高于 PAGE 电泳,仪器价位合适,又可同质谱仪一样给出杂带占比,量化的质控数据更具准确性和直观性(见图 1,图 2 所示):



图 1 毛细管电泳引物质控结果



图 2 毛细管电泳引物质控结果

 
来源:杭州厚泽生物科技有限公司 点击量:

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