对于诊断行业刚入门的童鞋们，或许没有那么了解其中工艺原理。万孚小编今天就带大家学习一下免疫层析工艺原理。告诉大家哪些检测标志物如何具体应用到免疫层析工艺。
 
免疫层析试剂相关的组成部分

     

免疫层析原理（以双抗体夹心法为例）：

将特异的抗体X标记胶体金/彩色微球/荧光微球后先固定于标记垫上，特异的抗体Y固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当干燥的样品垫一端浸入样品（血清/血浆、尿液、组织裂解液或唾液等）后，带标记的抗体X与抗原结合形成复合物Z，由于毛细管作用，样品将沿着酸纤维素膜向前移动，当移动至固定有抗体Y的区域时，样品中复合物Z即被抗体Y捕获，累积一定量后显色或受激发后发射荧光，对颜色或荧光信号进行判读分析，从而实现特异性的免疫诊断。

免疫层析法检测原理分类介绍

     

金标为鼠源性抗β-hCG单克隆抗体与胶体金的复合物，测试线包被羊抗α-hCG多克隆抗体，控制线包被羊抗鼠多克隆抗体。

妇女受孕的“指示剂” hCG是一种肽,α链和一条高度特异的β链。当待测尿液或血清中含有一定量的hCG时，样本通过层析作用到达金标位置hCG的β链和单抗β-hCG发生免疫反应，再层析到测试线位置，hCG的α链和多抗α-hCG 发生免疫反应，这样就把金标通过hCG桥连到测试线上，达到一定量后，金标显色为肉眼可见的水平，多余的金标继续泳动到控制线位置，由于多抗鼠和鼠源性抗β-hCG 单抗发生免疫反应，从而桥连胶体金显色，这样就得到阳性结果。

当尿液或血清中不含 hCG时，金标和测试线抗体不发生桥连，而控制线则显色，这样就得到了阴性结果。当测试线和控制线均不显色时，表示试剂盒无效。  

       

当待测尿液中含一定量以上的Morphine时，样本到达金标位置，和单抗Morphine-BSA发生免疫反应并完全饱和之，再层析到T线位置时，由于单抗Morphine-BSA lgG胶体金复合物已无空余的位点和测试线上的Morphine-BSA结合，故T线不显色，C线显色，这样得到的是阳性结果。

当待测尿液中不含 Morphine时，样本与金标不反应，再层析到T线位置时，固定在NC膜上的Morphine-BSA会“捕捉”单抗 Morphine-BSA胶体金复合物，故T线显色，C线也显色，得到阴性结果。当无C、T线时，表示试剂盒失效。
 

临床应用范围	检测的物质
检测蛋白质（标志物，非直接致病）	AFP、PCT、CRP、cTnI和MYO等
检测感染性疾病抗原	HBsAg、HbeAg、疟原虫抗原、大肠埃希菌抗原等
检测抗体	TB-Ab、Hp-Ab、HBsAb、HIV-Ab、抗登革热抗体等
检测激素	hCG，LH 、FSH、TSH
检测药物(毒品类，食品安全类)	如吗*啡、鸦片、沙丁胺醇等

 
当然要做好整个实验，涉及的方面很多。比如蛋白试剂和膜，溶解试剂的缓冲液、环境温度和湿度及用于蛋白固定在膜上的仪器设备还有包被材料，包被缓冲液，喷膜等等一系列工序和材料都是实验影响因素。当然其中最重要的还是原料的选择。所以，童鞋们需要在摸索中前行。好啦! 今天的分享就到这里。万孚小编下次继续跟您聊聊免疫诊断那些事。