pENTR223-HLA-B人源基因质粒价格_品牌:Xybio-丁香通官网

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英文名：BC013187.1

CAS号：详询

保质期：5年

供应商：上海烜雅生物科技有限公司

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基本信息
名称：pENTR223-HLA-B人源基因质粒
别称:BC013187.1
复制子:pUC
原核抗性:Spe
克隆菌株:DH5a
培养条件:37度

5'测序引物:	M13F
3'测序引物:	M13R

质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：人
基因类型：cDNA
原核抗性：Spe
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
pENTR223-HLA-B(BC013187.1) 是一个人cDNA基因克隆质粒。

质粒图谱

质粒序列
LOCUS Exported 3876 bp ds-DNA circular SYN 16-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3876
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
terminator 88..115
/label=rrnB T2 terminator
/note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 207..293
/gene="Escherichia coli rrnB"
/label=rrnB T1 terminator
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
primer_bind 357..373
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 389..487
/gene="mutant version of attL"
/label=attL1
/bound_moiety="LR Clonase(TM)"
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
misc_feature 488..1573
/label=HLA-B
/note="BC013187.1"
protein_bind complement(1575..1674)
/gene="mutant version of attL"
/label=attL2
/bound_moiety="LR Clonase(TM)"
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
promoter complement(1692..1710)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
primer_bind complement(1715..1731)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS 2162..2953
/codon_start=1
/gene="aadA"
/product="aminoglycoside adenylyltransferase (Murphy,
1985)"
/label=Spe
/note="confers resistance to spectinomycin and
streptomycin"
/translation="MREAVIAEVSTQLSEVVGVIERHLEPTLLAVHLYGSAVDGGLKPH
SDIDLLVTVTVRLDETTRRALINDLLETSASPGESEILRAVEVTIVVHDDIIPWRYPAK
RELQFGEWQRNDILAGIFEPATIDIDLAILLTKAREHSVALVGPAAEELFDPVPEQDLF
EALNETLTLWNSPPDWAGDERNVVLTLSRIWYSAVTGKIAPKDVAADWAMERLPAQYQP
VILEARQAYLGQEEDRLASRADQLEEFVHYVKGEITKVVGK"
rep_origin 3046..3634
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaata cgcgtaccgc
61 tagccaggaa gagtttgtag aaacgcaaaa aggccatccg tcaggatggc cttctgctta
121 gtttgatgcc tggcagttta tggcgggcgt cctgcccgcc accctccggg ccgttgcttc
181 acaacgttca aatccgctcc cggcggattt gtcctactca ggagagcgtt caccgacaaa
241 caacagataa aacgaaaggc ccagtcttcc gactgagcct ttcgttttat ttgatgcctg
301 gcagttccct actctcgcgt taacgctagc atggatgttt tcccagtcac gacgttgtaa
361 aacgacggcc agtcttaagc tcgggcccca aataatgatt ttattttgac tgatagtgac
421 ctgttcgttg caacaaattg ataagcaatg cttttttata atgccaactt tgtacaaaaa
481 agttggcatg cgggtcacgg cgccccgaac cgtcctcctg ctgctctcgg gagccctggc
541 cctgaccgag acctgggccg gctcccactc catgaggtat ttctacaccg ccatgtcccg
601 gcccggccgc ggggagcccc gcttcatctc agtgggctac gtggacgaca cgcagttcgt
661 gaggttcgac agcgacgccg cgagtccgag agaggagccg cgggcgccgt ggatagagca
721 ggaggggccg gagtattggg accggaacac acagatctgc aagaccaaca cacagactta
781 ccgagagagc ctgcggaacc tgcgcggcta ctacaaccag agcgaggccg ggtctcacac
841 cctccagagg atgtacggct gcgacgtggg gccggacggg cgcctcctcc gcgggcatga
901 ccagtacgcc tacgacggca aggattacat cgccctgaac gaggacctga gctcctggac
961 cgcggcggac acggcggctc agatcaccca gcgcaagtgg gaggcggccc gtgaggcgga
1021 gcagctgaga gcctacctgg agggcctgtg cgtggagtgg ctccgcagat acctggagaa
1081 cgggaaggag acgctgcagc gcgcggaccc cccaaagaca catgtgaccc accaccccat
1141 ctctgaccat gaggccaccc tgaggtgctg ggccctgggc ttctaccctg cggagatcac
1201 actgacctgg cagcgggatg gcgaggacca aactcaggac accgagcttg tggagaccag
1261 accagcagga gatagaacct tccagaagtg ggcagctgtg gtggtgcctt ctggagaaga
1321 gcagagatac acatgccatg tacagcatga ggggctgccg aagcccctca ccctgagatg
1381 ggagccatct tcccagtcca ccatccccat cgtgggcatt gttgctggcc tggctgtcct
1441 agcagttgtg gtcatcggag ctgtggtcgc tactgtgatg tgtaggagga agagctcagg
1501 tggaaaagga gggagctact ctcaggctgc gtccagcgac agtgcccagg gctctgatgt
1561 gtctctcaca gcttgcccaa ctttcttgta caaagttggc attataagaa agcattgctt
1621 atcaatttgt tgcaacgaac aggtcactat cagtcaaaat aaaatcatta tttgccatcc
1681 agctgatatc ccctatagtg agtcgtatta catggtcata gctgtttcct ggcagctctg
1741 gcccgtgtct caaaatctct gatgttacat tgcacaagat aaaaatatat catcatgcct
1801 cctctagacc agccaggaca gaaatgcctc gacttcgctg ctgcccaagg ttgccgggtg
1861 acgcacaccg tggaaacgga tgaaggcacg aacccagtgg acataagcct gttcggttcg
1921 taagctgtaa tgcaagtagc gtatgcgctc acgcaactgg tccagaacct tgaccgaacg
1981 cagcggtggt aacggcgcag tggcggtttt catggcttgt tatgactgtt tttttggggt
2041 acagtctatg cctcgggcat ccaagcagca agcgcgttac gccgtgggtc gatgtttgat
2101 gttatggagc agcaacgatg ttacgcagca gggcagtcgc cctaaaacaa agttaaacat
2161 catgagggaa gcggtgatcg ccgaagtatc gactcaacta tcagaggtag ttggcgtcat
2221 cgagcgccat ctcgaaccga cgttgctggc cgtacatttg tacggctccg cagtggatgg
2281 cggcctgaag ccacacagtg atattgattt gctggttacg gtgaccgtaa ggcttgatga
2341 aacaacgcgg cgagctttga tcaacgacct tttggaaact tcggcttccc ctggagagag
2401 cgagattctc cgcgctgtag aagtcaccat tgttgtgcac gacgacatca ttccgtggcg
2461 ttatccagct aagcgcgaac tgcaatttgg agaatggcag cgcaatgaca ttcttgcagg
2521 tatcttcgag ccagccacga tcgacattga tctggctatc ttgctgacaa aagcaagaga
2581 acatagcgtt gccttggtag gtccagcggc ggaggaactc tttgatccgg ttcctgaaca
2641 ggatctattt gaggcgctaa atgaaacctt aacgctatgg aactcgccgc ccgactgggc
2701 tggcgatgag cgaaatgtag tgcttacgtt gtcccgcatt tggtacagcg cagtaaccgg
2761 caaaatcgcg ccgaaggatg tcgctgccga ctgggcaatg gagcgcctgc cggcccagta
2821 tcagcccgtc atacttgaag ctagacaggc ttatcttgga caagaagaag atcgcttggc
2881 ctcgcgcgca gatcagttgg aagaatttgt ccactacgtg aaaggcgaga tcaccaaggt
2941 agtcggcaaa taaccctcga gccacccatg accaaaatcc cttaacgtga gttacgcgtc
3001 gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt
3061 tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt
3121 gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat
3181 accaaatact gtccttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc
3241 accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa
3301 gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg
3361 ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag
3421 atacctacag cgtgagcatt gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag
3481 gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa
3541 cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt
3601 gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg
3661 gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat cccctgattc
3721 tgtggataac cgtattaccg cctttgagtg agctgatacc gctcgccgca gccgaacgac
3781 cgagcgcagc gagtcagtga gcgaggaagc ggaagagcgc ccaatacgca aaccgcctct
3841 ccccgcgcgt tggccgattc attaatgcag ctggca
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片