慢病毒包装（lentivirus，LV）/过表达慢病毒构建与包装(全套）

提供商 ：杭州舒桐生物科技有限公司

服务名称 ：慢病毒包装

规格 ：1

背景介绍：病毒是一类能对人体细胞及其它动物细胞进行有效感染的微生物。由于其具有良好的基因递送效能，故而被科学家们改造成为进行基因治疗的主要递送工具。目前，病毒载体仍然是基因治疗试验最流行的递送方法，迄今为止，已用于大约三分之二的医学试验。按照时间的发展，在基因治疗中使用最广泛的病毒载体包括逆转录病毒（retro virus, RV）和慢病毒（lentivirus, LV）、腺病毒（adeno virus, Adv）以及腺相关病毒（adeno associated virus, AAV）等载体。
     
       慢病毒（lentivirus，LV）是逆转录病毒的一种，是RNA病毒，需要相对较长的孵育时间，所以称之为“慢”病毒。慢病毒区别于一般的逆转录病毒，它可以感染分裂和非分裂细胞，并能将外源基因整合到宿主基因组上实现长期稳定的表达，是体外和体内基因传递的有效工具，常用于肿瘤研究领域，稳定株构建，细胞功能研究，瘤内注射，基因治疗等研究。

        我司采用四质粒系统进行慢病毒包装。四质粒系统将Gag/Pol、Rev分别放在不同的载体上，增强了病毒载体的安全性。VSVG包膜的假构型慢病毒载体扩大了载体的靶细胞嗜性范围，而且增加了载体的稳定性，允许通过高速离心对载体进行浓缩，可有效提高病毒滴度。目前，我司可提供体内外实验所需的各种规格慢病毒，以满足客户多样化的实验需求。
       下面是舒桐可提过所有病毒具体服务内容：

 

慢病毒包装流程

      舒桐生物科技可以提供从慢病毒质粒构建至病毒包装的所有服务外包项目。而且舒桐生物科技提供全套的慢病毒载体和表达系统可用于体内和体外表达human/mouse/rat ORFs，lncRNA，circRNA，shRNAs和CRISPR/gRNA。下面是慢病毒从头合成的流程：

舒桐科技服务特色

1、载体全：多种表达载体、多种标签载体和多种报告基因可供客户选择。
2、货期短：Human ORF cDNA克隆和Human microRNA克隆可在2-3天穿梭至慢病毒载体，个性化定做慢病毒。
3、服务优：可根据客户具体实验，由公司专业技术人员提供载体构建方案，提供特殊定制服务。
4、赠送：赠送慢病毒助感染试剂，这对于难感染细胞有很大的帮助，下图是助感染试剂在HEK293、Raw264.7、SiHa中的效果图。

FAQs

1、什么情况下选用慢病毒？

慢病毒的宿主范围比较广，既能感染分裂细胞，也能感染非分裂的细胞，在体内外研究中均可选择慢病毒作为病毒载体。此外，慢病毒也是构建稳转株的理想病毒。

2、慢病毒载体可插入多大的 ORF 片段？

一般情况下，慢病毒载体可容纳8 kb插入片段。然而，插入的ORF基因大于4 kb时会大大降低病毒的包装效率，进而影响病毒滴度甚至基因表达。

3、用于慢病毒感染的细胞接种量是多少？

将状态良好的目的细胞接种到24孔板，细胞浓度一般为1×105/mL细胞，接种细胞数量需要考虑到细胞活力因素、状态因素、生长快慢因素、分裂因素等，一般是保证病毒感染时细胞汇合率达到50%-70%为佳。

4、什么是 MOI ？

MOI （multiplicity of infection），即感染复数，指的是感染时病毒与细胞数量的比值。一般认为MOI是一个比值，没有单位。

5、慢病毒是否能够稳定表达基因？

是的。慢病毒能将外源基因整合到宿主基因组中，不会随着细胞分裂传代而丢失，因此能实现外源基因的长期稳定表达。

6、维真慢病毒的包装周期是多久？

如果客户提供构建好的慢病毒载体，那么包装时间一般为2周左右，若包含前期载体构建等的时间，时间大概在5周左右。

7、慢病毒感染细胞后，目的基因的表达什么时间达到峰值？

慢病毒感染目的细胞后，一般情况下，在72-96h目的基因的表达能达到峰值，但是对于一些特殊细胞、如增殖传代比较慢的细胞，蛋白表达达到峰值则需要更长的时间。

8、怎样提高慢病毒的感染效率？

细胞良好的生长状态和感染时适合的 MOI 值是达到高感染效率的保证。一般可以通过提高感染时的 MOI 值来提高病毒的感染效率，必要时可在感染时加入助感染试剂ADV-HR来提高慢病毒的感染效率。

9、慢病毒感染后，细胞状态很差，甚至出现死亡，为什么？

慢病毒会对细胞造成一定的毒性，不同细胞对毒性的耐受力不同。建议调整并降低感染时使用的MOI值，即可在细胞准备时增加铺板细胞的汇合率（可提高至 70%），调整感染时加入的病毒量。此外，还可选择在感染4小时后换液，用新鲜的完全培养液继续培养观察。