慢病毒感染/稳定细胞株构建

提供商 ：杭州舒桐生物科技有限公司

服务名称 ：慢病毒感染稳定细胞株构建

规格 ：一套

稳定表达细胞株（稳转细胞株）指能持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达的细胞株。在基因功能的研究中，稳定表达细胞株则弥补了瞬时感染（或转染）一些功能实验中由于外源基因表达时间短的缺陷，便于长期观察基因对于细胞功能的影响以及蛋白间相互作用。构建稳定细胞株的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选混合阳性克隆（针对转染效率较高的细胞株）；有些细胞株转染效率比较低，混合阳性克隆蛋白表达或降低不均一不明显的情况下，还需在阳性混合克隆的基础上，得到单细胞长出的阳性单克隆，继而得到稳定转染细胞株。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)等。 舒桐生物科技有限公司拥有丰富的稳定细胞株构建经验。根据不同类型和转染效率的细胞以及需要表达的外源基因的大小，针对性地选择病毒感染或者转座子介导的质粒稳定转染的方法进行稳定表达细胞株构建。 慢病毒载体（Lentiviral vector, LVs）是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，可有效的感染进入目的细胞,对分裂期细胞及非分裂期细胞均具有很高的感染效率。它能高效的将目的基因（或shRNA）导入各种细胞系。慢病毒载体基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，目的基因或转录shRNA的DNA随机整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产生RNAi干扰。利用载体中所含的抗性标志进行筛选，可得到稳定表达或沉默特定基因的细胞株。  

1. 能将外源基因有效整合入宿主染色体，外源基因表达水平较高、表达稳定；
2. 广泛的宿主，可感染分裂和不分裂的细胞，几乎可以感染所有类型的细胞，特别适合质粒载体转染效率低的细胞；
3. 适用范围广，可用于体外细胞系和活体动物模型，研究基因和RNAi等；
4. 转导效率高，目的基因整合到宿主细胞基因组的概率大大增加。

	周期
慢病毒感染稳定多克隆细胞株构建	1-2个月
慢病毒感染稳定单克隆细胞株构建	2-3个月

1. 客户提供目的基因的序列，如果提供模板，请告知载体、酶切稳点等信息；
2. 序列过长可能影响病毒滴度；
3. 目的蛋白的功能验证另外收费。

1. 稳转细胞株冻存细胞2支；
2. 实验测序数据；
3. 详细的实验结题报告（包括实验步骤，引物信息，实验结果等）