基因敲除基因编辑实验服务生物实验动物实验整体课题外包代做

提供商 ：哈尔滨中科赛恩斯生物

服务名称 ：基因敲除

基因敲除是用含有一定已知序列的DNA片段与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组,整合至受体细胞基因组中并得到表达的一种外源DNA导入技术。它是针对某个序列已知但功能未知的序列，改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏蔽，进而推测出该基因的生物学功能。
每一个CRISPR / Cas9敲除质粒由3条质粒组合确保识别和剪切的特定基因，获得最大的敲除效果。每条质粒由GeCKO文库特有的20nt序列编码。每一包装20ug ，最多可进行20次转染。Cas9 / gRNA复合物与原间隔邻近基序（PAM）位点结合并解开DNA。gRNA与PAM位点附近的基因组DNA中的靶基因座结合。Cas9在三个特异性位点切割三个gRNA质粒靶向的基因的5'外显子。

   

• 常规基因敲除：根据基因序列设计合成sgRNA与Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵，Cas9核酸酶、 sgRNA、基因组靶序列结合并切割双链DNA ，通过非同源性末端接合(NHEJ)修复途径造成靶基因的移码突变或片段敲除，从而实现基因敲除。NHEJ修复是随机的，可能在同一小鼠体内不同细胞造成的修复结果不同，F0小鼠需要繁殖一代，获得稳定遗传的敲除杂合子小鼠。
• 条件性基因敲除：条件性基因敲除主要是通过染色体位点特异性重组酶系统Cre-LoxP、 FLP-Frt和Dre-Rox来实现的。其中最为常用的是Cre-LoxP系统，在待敲除的一段目的DNA序列的两端各放置一个LoxP序列，得到Flox (Flanked by loxP) 小鼠。将Flox小鼠与特异性表达Cre的工具鼠交配，即可获得具有组织或细胞特异性敲除目的基因的小鼠。
• KO first：KO first (Conditional Ready)是一种多用途的模型，与条件敲除策略类似，在目的片段的两侧分别放置方向相同的LoxP位点，同时还在靶片段5’端内含子中放置一个两侧带有FRT位点的SA-IRES-reporter片段。这类小鼠模型主要有两方面用途。与Cre工具鼠交配可去除Neo基因及Flox区域，成为报告基因（reporter）和基因剔除小鼠，用靶基因的启动子表达reporter基因，通过检测reporter基因的表达即可跟踪靶基因的表达情况。

   

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