病毒基因组 DNA/RNA 提取试剂盒

一、简介

病毒总核酸提取试剂盒适合于从血清、血浆、组织匀浆等样品中提取病毒总核酸。试剂   盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，也无需进行耗时的醇类沉   淀。该产品已经成功地提取了乙肝 A/C、丙肝、以及诺如病毒标准品等的核酸。获得的DNA/RNA 可直接用于 PCR、RT-PCR、以及 LAMP 等系列下游实验。
二、组成 XK0712006

成份                  装量

提取次数                   50 次
核酸吸附柱                  50 个

2ml 收集管
Proteinase K Protease Dissolve Buffer

50 个
24 mg
2 ml

注意：

Carrier RNA                              250 μg
Buffer AL                                 20 ml
Buffer VHB                               11 ml
Buffer RW2                               20 ml
Nuclease Free Water                         10 ml

1. Carrier RNA 固体使用前必须用 Nuclease Free Water 溶解至 1µg/µl，涡旋溶解。分装保存-70℃。如需长期保存于-20℃，请先按照使用次数分装后保存。
2. 溶解 Proteinase K（20mg/ml）：加入 Protease Dissolve Buffer 溶解 Proteinase K 至终浓度为 20mg/ml。Proteinase K 干粉在 2-8℃保存一年，但溶解的 Proteinase K 须分装保存于

-20℃。 反复冻融 Proteinase K  会影响其活性。

1. Buffer VHB 使用前必须用 14 ml 无水乙醇稀释，并于室温保存。
2. Buffer RW2 使用前必须用 80 ml 无水乙醇稀释，并于室温保存。三、保质期

本产品除 Proteinase K 和 Carrier RNA 外，其它组份可在室温(15-25℃)保存 12 个月，长期保存时需置于 2-8℃。Proteinase K 和 Carrier RNA 干粉室温运输，收到试产品后请保存于-20℃，溶解后分装保存于-20℃。

四、需要准备的材料和工具

1. Buffer PBS
2. 无水乙醇
3. 洁净的镊子和剪刀
4. 微量移液器（100-1000μl，10-100μl）
5. 无 RNA 酶的离心管和吸头
6. 涡旋振荡器
7. 离心机（转速≥10,000 rpm）

五、实验步骤

1. 转移 20 µl Proteinase K 至 1.5 ml 离心管中。
2. 转移 200 µl 样品，如血清、血浆、尿液、 培养液上清、或其它无细胞体液至装有Proteinase K  的离心管中，振荡混匀 5 秒。若样品不足 200 µl，用 Buffer PBS 或 Nuclease Free Water 补足。

（固体组织样品先用 Buffer PBS 浸泡或匀浆后，离心取上清进行操作；干粉样品请先用 Buffer PBS 充分溶解后离心取上清进行操作。）

1. 转移 200 µl Buffer AL/Carrier RNA 至样品中，涡旋混匀 15 秒。

使用前，按每 1 ml Buffer AL 加入 15 µl Carrier RNA（1 µg/µl）。该混合液室温可保存 2
天。

1. 56ºC 水浴 10 分钟。
2. 加入 250µl 无水乙醇至裂解液中，涡旋混匀 15 秒。室温静置 3 分钟。
3. 把核酸吸附柱装在 2ml 收集管中。转移混合液至柱子中。8,000 g 离心 30-60 秒。
4. 倒弃滤液把柱子装回收集管中。加入 500 µl Buffer VHB（已用无水乙醇稀释）至

柱子中。8,000 g 离心 30-60 秒。
使用前 Buffer VHB 必须按瓶子标签所示用无水乙醇稀释。

1. 倒弃滤液把柱子装回收集管中。加入 500 µl Buffer RW2（已用无水乙醇稀释）至柱子中。8,000 g 离心 30-60 秒。

使用前 Buffer RW2 必须按瓶子标签所示用无水乙醇稀释。

1. 倒弃滤液把柱子装回收集管。加入 500 µl Buffer RW2（已用无水乙醇稀释）至柱子中。8,000 g 离心 30-60 秒。
2. 倒弃滤液把柱子套回收集管。10,000 rpm  离心空柱 3 分钟甩干柱子。
3. 将柱子转移至新的 1.5ml 离心管。加入 15~30 µl Nuclease Free Water 至柱子的膜中央。13,000 g 离心 1 分钟。
4. 弃去柱子，把 DNA/RNA 保存于-80ºC。六、常见问题解答

1. 柱子堵塞
   1. 样品用量太多：处理动物抗凝血液时，样品量控制在 100~150 µl。尽量使用无细胞的样品，如血浆、血清、组织匀浆液的上清等。
   2. Proteinase K 活性下降：重新制备 Proteinase K。使用后 Proteinase K 必须保存于

-20℃。Proteinase K 与 Buffer AL 不能预先混合。

1. 1. 样品含固体颗粒：在第 5 步加入乙醇前，10,000 g 离心 3 分钟去除未消化的杂质， 转移上清液至新的离心管后再加入乙醇。
   2. 样品裂解不充分：样品与 Buffer AL 混匀不充分。重新提取，加入 Buffer AL 后先颠倒混匀 3~5 次，然后以最高速度涡旋让样品与 Buffer AL 充分混匀。
2. 下游应用结果不理想
   1. 样品被反复解冻：避免反复冻融样品。推荐使用新鲜样品或只解冻过一次的样品。
   2. Nuclease Free Water 被污染：更换新的 Nuclease Free Water 或 DEPC 处理水。
   3. 试剂准备有误：按瓶子标签所示，加入合适体积的无水乙醇至 Buffer VHB 和

Buffer RW2 中。

1. 1. Proteinase K 活性下降：重新制备 Proteinase K。使用后 Proteinase K 必须立即保存于-20℃。分装保存 Proteinase K，避免反复冻融。
   2. 乙醇残留：柱子在洗脱前，需要空甩去除乙醇。对于敏感的应用，柱子在洗脱后， 打开柱子的盖子，放置 10~15 分钟让乙醇彻底挥发。
   3. 洗脱效率：处理富含 DNA 的样品时，把 Nuclease Free Water 预热至 55℃后再