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文献和实验
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库存 :33
英文名 :Polygalacturonase (PG) test kit
CAS号 :无
保质期 :1年
供应商 :上海晅科生物科技有限公司
保存条件 :2-8℃
规格 :50管/24样
多聚半乳糖醛酸酶(ploygalacturonase,PG)试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15)是一种细胞壁结合蛋白,可以催化果胶分子中 α-(1,4)-聚半
乳糖醛酸的裂解,参与果胶的降解,使细胞壁结构解体,导致果实软化,与果实成熟、叶和花的脱落、病原物防御,细胞伸展发育以及木质化有关,在植物抗病性和食品贮藏保鲜领域具有较高的研究价值。
测定原理
多聚半乳糖醛酸酶水解果胶酸生成半乳糖醛酸,具有还原性醛基,与 DNS 试剂反应生成红棕色物质,在 540nm 有特征吸收峰,测定 540nm 处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。试剂组成和配制
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 25mL×1 瓶,4℃避光保存。
酶液提取
- 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,
- 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议
- 培养液:直接检测。
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酶活性计算公式
标准曲线:y = 3.9642x - 0.008;R2 = 0.9996;x 为标准品浓度,mg/mL;y 为吸光值。
- 按照蛋白浓度计算
PG 活性(mg/h/mg prot)= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T
- 按照样本质量计算
一个酶活力单位。
PG 活性(mg/h/g 鲜重)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷W
- 按液体体积计算
PG 活性(mg/h/mL)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷V 样÷T=2.523×(ΔA+0.008)
- 按细胞数量计算
PG 活性(mg/h/104cell)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷细胞数量
V 反总:反应总体积,0.5mL;V 样:反应中样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,
1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,0.5h
注意事项
煮沸样本建议将样本在沸水中煮沸 10 分钟,以将酶彻底灭活。上海晅科生物科技有限公司
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