土壤过氧化物酶（Solid- Peroxidase，S-POD）试剂盒说明书

微量法 100 管/96 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

S-POD 主要来源于土壤微生物，能够氧化土壤有机物质产生过氧化物，在腐殖质的形成过程中具有重要作用。

测定原理：

S-POD 催化有机物质氧化成醌，后者在 430nm 有特征光吸收。

自备用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、yi醚 50mL（不允许快递）和蒸馏水。

相关图片：

试剂组成和配制：

试剂一：粉剂×2 瓶，4℃保存；临用前取一瓶，加入 6mL 蒸馏水充分溶解后待用；用不完的试剂 4℃保存一周。
试剂二：液体 2.5mL×1 瓶，4℃保存； 试剂三：液体 6mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：yi醚 50mL×1 瓶，4℃保存；（自备）

样品处理：

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。

测定步骤：

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 430nm，蒸馏水调零。
2、加样表

试剂名称	测定管
风干土样（g）	0.02
试剂一（μL）	100
试剂二（μL）	20

振荡混匀，30℃恒温培养 1 h

试剂三（μL）	50
试剂四（μL）	430

振荡数次，25℃室温静置 30min，吸取 200μL 上层液于 430nm 处测定吸光值A
（注意：1、因yi醚粘度小，易掉液，吸取前需先将枪头在上层液里润洗 2~3 次，再转移测定；2、yi醚易挥发，转移到 96 孔板后立即测定，最好一个一个测定）。
 

S-POD 活力计算

1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为 y = 8.97x -0.003；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值 A。单位的定义：每天每 g 土样中产生 1mg 紫色没食子素定义为一个酶活力单位。
S-POD 活力（mg/d/g 土样）＝(A+0.003) ÷8.97×V 反总÷W÷T=80×(A+0.003)
T：反应时间，1h=1/24d； V 反总：反应体系总体积 0.6mL；W：样本质量，0.02g。

1. 用 96 孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为 y = 4.485x -0.003；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值 A。单位的定义：每天每 g 土样中产生 1mg 紫色没食子素定义为一个酶活力单位。