Omc-06 细胞核 提取试剂盒

库存 ：大量

保质期 ：12个月

供应商 ：科邦兴业（北京）科技有限公司

保存条件 ：4 ℃保存

规格 ：kit

Omc-06 细胞核 提取试剂盒

产品简介
细胞核是细胞内最大的细胞器，也是遗传物质分布的重要场所，分离细胞核，可用于转录调控
相关的生物学实验。本产品利用蔗糖密度梯度离心法，能够快速且完整的分离细胞核。

特点与优势
1. 本产品操作简单，可以快速分离细胞核。
2. 本产品分离的细胞核完整，纯度高。

使用说明
1. 细胞处理。胰酶消化法收集贴壁生长细胞，或离心法直接收集悬浮培养细胞，每个样品中细胞
数量为 2×10 7 ，加入 1 ml Buffer NA，震荡（Vortex），重悬细胞。
2. 细胞裂解。将细胞重悬液转入匀浆器，匀浆 50-100 次，至显微镜下观察到 80%以上细胞都破
碎为止。
3. 离心。将细胞匀浆液转移至 1.5 ml 离心管，600×g，4 ℃离心 10 min，上清转移至新的 1.5 ml
离心管，即为细胞浆（可保存在-80 ℃），沉淀为粗细胞核。
4. 粗细胞核中加入 1 ml Buffer NA 重悬，600×g，4 ℃离心 10 min，弃上清。
5. 细胞核纯化。向细胞核沉淀中加入 1 ml Buffer NB，震荡（vortex）重悬，16,000×g，4 ℃离心
15-30 min，弃上清。
6. 细胞核洗涤。向细胞核沉淀中加入 1 ml Buffer NA，震荡（vortex）重悬，600×g，4 ℃离心 10 min，
弃上清，沉淀即为纯化细胞核。
7. 细胞核可暂时存放在-80 ℃冰箱中，也可立即裂解，抽提核蛋白。
8. 细胞核裂解。主要包括以下二种方式。
1)  变性裂解液裂解。利用本公司的细胞裂解液（Laemmli Buffer，2×）重悬细胞核沉淀，裂解
细胞核，提取细胞核蛋白，用于 western blot 分析。但提取蛋白已经变性，不可用于酶活性
测定。
2)  RIPA 裂解液裂解。利用温和的 RIPA 裂解液（不含 SDS）重悬细胞核沉淀，裂解细胞核，
提取蛋白，用于酶活性测定及 western blot 等实验。

注意事项
1. 整个操作过程需在低温条件下进行，所用试剂提前预冷。
2. 为了减少其它细胞器污染，提取的细胞浆溶液可以12,000×g，4 ℃离心15 min，弃沉淀，上清即
为纯化后的细胞浆，转移至新的离心管，冻存。
3. 为了抑制蛋白降解，实验过程中可添加蛋白酶抑制剂（如cocktail等）。