小鼠脾脏淋巴细胞分离实验技术服务

提供商 ：菲优特

服务名称 ：小鼠脾脏淋巴细胞分离实验技术服务

规格 ：样

脾脏是机体重要的免疫器官之一，脾脏中含有大量的淋巴细胞。在老鼠中，由于老鼠血液量少，故经常需要从老鼠脾脏中获取大量的淋巴细胞，主要是T/B细胞，用于体外免疫实验。

方法步骤

1.颈椎脱臼法处死小鼠。解剖小鼠腹部。扒开内脏，可看到如图所示的长约3-4厘米呈长条状的深红色组织，即为脾脏;

2.将分离得到的脾脏组织浸泡在干净的PBS溶液中;

3.在一个培养皿中加入适量的PBS溶液，放一个细胞筛，将脾脏取出放于细胞筛中。取干净的注射器，用其按压处的末端对组织进行碾压。膜内细胞会慢慢游离出来，经过细胞筛之后，悬浮在培养皿溶液中;

4.洗一洗细胞筛，收集细胞筛外PBS，400g, 50ml离心管离心，15min;

5.去上清，加红细胞裂解液2ml，重悬。37度2min;

6.离心400g，15min，PBS 5ml洗一遍，离心400g，除去上清;

7.细胞培养基重悬5ml，除去其中不可溶的组织纤维，悬浮液取100ul细胞计数;

8.稀释细胞，培养或者铺板。

注意：
取动物脾脏组织时，应注意取材的无菌操作。分离出脾脏组织,，研磨后过200目筛网，保证所分离的细胞为单个细胞悬液，获得细胞悬液后应该使用相应的淋巴细胞分离液进一步分离单个核细胞。