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库存 :100
英文名 :N-acetyl-β-D-glucosidase (NAG) test kit
CAS号 :无
保质期 :1年
供应商 :上海晅科生物科技有限公司
保存条件 :2-8℃
规格 :50管/24样
N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG) 试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:
NAG 是溶酶体中的一种酸性水解酶,广泛存在于各种组织、体液和细胞中,以前列腺和肾近曲小管细胞内含量最高。NAG 活性变化与机体某些病理状态密切相关。测定原理:
NAG 分解 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基ben酚,后者在 400nm 有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算 NAG 活性。自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。试剂一:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 5mL 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。试剂三:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。粗酶液提取:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量
(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 400nm,蒸馏水调零。2、样本测定(在 EP 管中依次加入下列试剂):
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
试剂一 | 200 | |
蒸馏水 | 200 | |
试剂二 | 250 | 250 |
样本 | 50 | 50 |
试剂三 | 1000 | 1000 |
相关图片;
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.00543x +0.0083;x 为标准品浓度(nmol/mL),y 为吸光值。2、血清(浆)NAG 活力的计算
单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟产生 1nmol 对-硝基ben酚定义为一个酶活性单位。
NAG 活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00543×V 反总]÷V 样÷T =61.39×(ΔA-0.0083)
3、细胞、细菌和组织中 NAG 活力的计算
- 按样本蛋白浓度计算:
NAG 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.00543×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T
=61.39×(ΔA-0.0083) ÷Cpr
- 按样本鲜重计算:
NAG 活性(nmol/min/g 鲜重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00543×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=61.39×(ΔA-0.0083)÷W
- 按细菌或细胞密度计算:
NAG 活性(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.00543×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T
=0.123×(ΔA-0.0083)
V 反总:反应体系总体积,0.5mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g; 500:细胞或细菌总数,500 万;T:反应时间,30min。
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