淀粉脱分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/24 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义

DBE 能够专一性地裂解支链淀粉的α-1，6 糖苷键，产生线性的葡萄糖链，在调整支链淀粉分子的链长方面有重要的作用。

测定原理

采用 3，5-二硝基水杨酸法测定 DBE 催化支链淀粉产生的还原糖，通过测定还原糖含量的变化来计算DBE 活性。

需自备的的仪器和用品

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水

试剂的组成和配制

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，4℃保存；临用前每支加入 6mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂 4℃保存；
试剂三：液体 12mL×1 瓶，4℃保存； 试剂四：液体 35mL×1 瓶，4℃保存。粗酶液提取
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL
提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长到 540 nm，蒸馏水调零。
2、加样表

试剂名称（μL）	对照管	测定管
95℃水浴 5min 后灭活的样本	200
粗酶液		200
试剂一	200
试剂二		200

混匀，37℃准确保温 2h
 

试剂三	200	200
试剂四	600	600

混匀，95℃水浴 5min，于 1mL 玻璃比色皿 540nm 处读取各管吸光值。ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设个一个对照管。
注意：可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行 5min 95℃沸水浴处理。

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DBE 活力单位的计算

标准条件测定回归方程为 y = 3.8458x - 0.165；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。

1. 按照蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白每 h 催化产生 1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
DBE 活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T