产品详情
文献和实验
相关推荐
库存 :100
英文名 :ADPG Pyrophosphorylase (AGP) Test Kit
CAS号 :无
保质期 :1年
供应商 :上海晅科生物科技有限公司
保存条件 :2-8℃
规格 :100管/96样
腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose pyrophosphorylase, AGP)活性测定试剂盒
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中,催化葡萄糖-1-磷酸与 ATP 反应生成淀粉合成的直接前体 ADPG,是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。测定原理
AGP 催化的逆向反应生成 G1P,在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH,340nm 下测定 NADPH 增加速率,即可计算AGP 活性。需自备的的仪器和用品
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水试剂的组成和配制
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存; 试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 9mL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 4mL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
粗酶液制备
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。2、试剂一置 30℃保温 10min 以上。
3、在 EP 管中按顺序加入下列试剂
试剂名称(μL) | 测定管 |
试剂一 | 50 |
试剂二 | 80 |
样本 | 10 |
上清液 | 80 |
试剂一 | 85 |
试剂三 | 35 |
ΔA=A2-A1。
相关图片:
AGP 活性计算
- 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。
AGP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T×稀释倍数
=2813×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
AGP(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T×稀释倍数
=2813×ΔA÷W
V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d: 比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.01mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T: 反应时间,2 min;稀释倍数:1.75;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。
- 使用 96 孔板测定的计算公式如下:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。
AGP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T×稀释倍数
=5627×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
AGP(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T×稀释倍数
=5627×ΔA÷W
V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d: 96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T: 反应时间,2 min;稀释倍数:1.75;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。
上海晅科生物科技有限公司
实名认证
钻石会员
入驻年限:6年