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文献和实验
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库存 :100
英文名 :Beta-amylase test kit
CAS号 :无
保质期 :1年
供应商 :上海晅科生物科技有限公司
保存条件 :2-8℃
规格 :100管/48样
β-淀粉酶(β-amylase,β-AL)试剂盒
微量法 100 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:
淀粉酶负责水解淀粉,主要包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可随机地作用于淀粉中的 α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。测定原理:
还原糖还原 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸,β-淀粉酶不耐热。根据上述特性,钝化其中之一,就可测出另一种淀粉酶的活力。需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。试剂的组成和配制:
试剂一:30mL×1 瓶,常温保存,若有黄色晶体析出,需 90℃加热溶解后再用; 试剂二:15mL×1 瓶,4℃保存,若出现沉淀析出,需 70℃加热溶解后再用。 粗酶液提取:组织:称取 0.1~0.2g 样本(建议称取约 0.1g 样本),加入 1mL 蒸馏水,研磨匀浆;将匀浆
倒入离心管中,提取液在室温下放置提取 15min,每 5min 振荡 1 次,使其充分提取;3000g,
25℃离心 10min,取上清液加蒸馏水定容至 10 mL,摇匀,即淀粉酶原液。
吸取上述淀粉酶原液 1mL,加入 4mL 蒸馏水,摇匀,即为淀粉酶稀释液,用于(α+β)淀粉酶总活力的测定。
血清(浆)等液体样本:(1)直接检测 α-淀粉酶。(2)吸取淀粉酶原液 1mL,加入 4mL 蒸
馏水,摇匀,即为淀粉酶稀释液,用于(α+β)淀粉酶总活力的测定。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长到 540 nm,蒸馏水调零。2、试剂一和试剂二 40℃预热 10min.
3、测定操作表:
试剂名称(μL) | α-淀粉酶活力测定 | 总淀粉酶活力测定 | ||
对照管 | 测定管 | 对照管 | 测定管 | |
淀粉酶原液 | 75 | 75 |
淀粉酶稀释液 | 75 | 75 | ||
蒸馏水 | 75 | 75 | ||
试剂二 | 75 | 75 |
试剂一 | 150 | 150 | 150 | 150 |
相关图片:
酶活性计算:
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
2、α-淀粉酶活性
- 按照样本质量计算
α-淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=[(A2-A1+0.1778)÷3.7215×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=1.075×(A2-A1+0.1778)÷W
- 按照蛋白质含量计算
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(A2-A1+0.1778)÷3.7215×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T
=0.1075×(A2-A1+0.1778) ÷Cpr
- 血清(浆)等液体样本中 α-淀粉酶活性计算
α-淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(A2-A1+0.1778)÷3.7215×V 反总]÷V 样÷T=0.1075×(A2-A1+
0.1778)
3、总淀粉酶活性计算
- 按照样品质量计算
总淀粉酶活性(mg/min//g 鲜重)=5×[(A4-A3 + 0.1778)÷3.7215×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=5.375×(A4-A3+0.1778)÷W
- 按照蛋白质含量计算
总淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3+0.1778)÷3.7215×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T
=0.5375×(A4-A3+0.1778) ÷Cpr
- 血清(浆)等液体样本中总淀粉酶活性计算
=0.5375×(A4-A3+0.1778)
4、β-淀粉酶活性计算
- 按照样本质量计算
β- 淀 粉 酶 活 性 (mg/min/g 鲜 重 )= 淀 粉 酶 总 活 性 -α- 淀 粉 酶 活 性 =[5.375×(A4-A3 +
0.1778)-1.075×(A2-A1+0.1778)]÷W
- 按照蛋白质含量计算
β- 淀粉酶活性( mg/min/mg prot ) = 淀粉酶总活性-α- 淀粉酶活性=[0.5375×(A4-A3 +
0.1778)-0.1075×(A2-A1+0.1778)]÷Cpr
- 血清(浆)等液体样本中 β-淀粉酶活性计算
β- 淀 粉 酶 活 性 ( mg/min/mL ) = 淀 粉 酶 总 活 性 -α- 淀 粉 酶 活 性 =0.5375×(A4-A3 +
0.1778)-0.1075×(A2-A1+0.1778)
5:总淀粉酶稀释倍数;V 反总:反应体系总体积,0.15mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.075 mL;V 样总:提取液总体积,10 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,5min。
- 用 96 孔板测定的计算公式如下
2、α-淀粉酶活性
- 按照样本质量计算
α- 淀 粉 酶 活 性 (mg/min/g 鲜 重 )=[(ΔA + 0.1778)÷2.481×V 反 总 ]÷(W×V 样 ÷V 样总)÷T=1.612×(ΔA+0.1778)÷W
- 按照蛋白质含量计算
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=[(ΔA+0.1778)÷2.481×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T =0.1612
×(ΔA+0.1778) ÷Cpr
- 血清(浆)等液体样本中 α-淀粉酶活性计算
α-淀粉酶活性(mg/min/mL)=[(ΔA+0.1778)÷2.481×V 反总]÷V 样÷T =0.1612×(ΔA+0.1778)
3、总淀粉酶活性计算
- 按照样本质量计算
总淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=5×[(A4-A3+0.1778)÷2.481×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=8.06×(ΔA+0.1778)÷W
- 按照蛋白质含量计算
总淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3+0.1778)÷2.481×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T
=0.806×(A4-A3+0.1778) ÷Cpr
- 血清(浆)等液体样本中总淀粉酶活性计算
=0.806×(A4-A3+0.1778)
4、β-淀粉酶活性计算
- 按照样本质量计算
β- 淀 粉 酶 活 性 (mg/min/g 鲜 重 )= 淀 粉 酶 总 活 性 -α- 淀 粉 酶 活 性 =[8.06×(A4-A3 +
0.1778)-1.612×(A2-A1+0.1778)]÷W
- 按照蛋白质含量计算
β- 淀粉酶活性( mg/min/mg prot ) = 淀粉酶总活性-α- 淀粉酶活性=[0.806×(A4-A3 +
0.1778)-0.1612×(A2-A1+0.1778)]÷Cpr
- 血清(浆)等液体样本中 β-淀粉酶活性计算
β- 淀 粉 酶 活 性 ( mg/min/mL ) = 淀 粉 酶 总 活 性 -α- 淀 粉 酶 活 性 =0.806×(A4-A3 +
0.1778)-0.1612×(A2-A1+0.1778)
5:总淀粉酶稀释倍数;V 反总:反应体系总体积,0.15mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.075 mL;V 样总:提取液总体积,10 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,5min。
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