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文献和实验
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库存 :69
英文名 :Alpha-amylase test kit
CAS号 :无
保质期 :1年
供应商 :上海晅科生物科技有限公司
保存条件 :2-8℃
规格 :50管/24样
α-淀粉酶(α-amylase,α-AL)试剂盒
分光光度法 50 管/24 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
淀粉酶负责水解淀粉,包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的 α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。
测定原理:
还原糖还原 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。β-淀粉酶不耐热,在 70℃钝化 15min,从而测定 α-淀粉酶活性。需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。试剂的组成和配制:
试剂一:25mL×1 瓶,常温保存,若有黄色晶体析出,需 90℃加热溶解后再用; 试剂二:20mL×1 瓶,4℃保存,若有沉淀析出,需 70℃加热溶解后再用。粗酶液提取:
组织:称取 0.1~0.2g 样本(建议称取约 0.1g 样本),加 1 mL 蒸馏水匀浆;将匀浆倒入离心管中,在室温下放置提取 15min,每隔 5min 振荡 1 次,使其充分提取;3000g,25℃离心10min,吸取上清液并且加蒸馏水定容至 10 mL,摇匀,即为淀粉酶原液。血清(浆):直接检测。
操作步骤和加样表(在 1.5mLEP 管中依次加入下列试剂):
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长到 540 nm,蒸馏水调零。
2、 试剂一或试剂二 40℃预热 10min
3、测定步骤
试剂(μL) | 对照管 | 测定管 |
α-淀粉酶原液 | 250 | 250 |
蒸馏水 | 250 | |
试剂二 | 250 |
试剂一 | 500 | 500 |
相关图片:
α-淀粉酶活性计算:
1、标准条件下测定回归曲线为 y=3.7215x -0.1778; x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。2、α-淀粉酶活性
- 按照样本质量计算
α- 淀 粉 酶 活 性 (mg/min/g 鲜 重 )=[(ΔA + 0.1778)÷3.7215×V 反 总 ]÷(W×V 样 ÷V 样总)÷T=1.075×(ΔA+0.1778)÷W
- 按照蛋白质含量计算
(ΔA+0.1778) ÷Cpr
- 血清(浆)样本中 α-淀粉酶活性计算
α-淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA+0.1778)÷3.7215×V 反总]÷V 样÷T=0.1075×(ΔA+0.1778)
V 反总:反应体系总体积,0.5mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.25 mL;V 样总:提取液总体积,10 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间, 5min。
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