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文献和实验
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库存 :33
英文名 :Triglyceride (TG) content test kit
CAS号 :无
保质期 :1年
供应商 :上海晅科生物科技有限公司
保存条件 :2-8℃
规格 :50管/48样
甘油三酯(triglyceride, TG)含量测定试剂盒
分光光度法 50T/48S
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
TG 是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,不仅是细胞膜的主要成分,也是重要呼吸底物。测定原理:用异丙醇提取TG,脂蛋白酯酶水解 TG 生成甘油和脂肪酸(FFA),甘油与三磷酸腺苷在甘油激酶和磷酸甘油氧化酶催化下生成 H2O2,过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在 505 nm 处有特征吸收峰。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水试剂组成和配置:试剂一:液体 60 mL×1 瓶,4℃保存。试剂二:液体 26 mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 26 mL×1 瓶,4℃避光保存。
TG 的提取:
1、 组织中 TG 的提取:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆,8000g,4℃离心 10min,取上清,即TG 待测液。2、细胞、细菌中 TG 的提取:先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内,离心后弃上清, 加 1mL 试剂一,超声波破碎 1min(强度 20%,超声 2s,停 1s),8000g,4℃离心 10min,取上清,即 TG 待测液。
3、血清(浆)样品:直接测定。测定操作:
可见分光光度计预热 30min,调节波长到 505 nm。
试剂(μL) | 空白管 | 测定管 |
样本 | 50 | |
试剂一 | 50 | |
试剂二 | 475 | 475 |
试剂三 | 475 | 475 |
相关图片:
计算公式:
标准曲线:y = 0.6522x - 0.0199; R2 = 0.9979;x:标准品浓度(mg/mL) y:吸光值差值 ΔA。- 血清(浆)中甘油三酯含量计算:
- 组织、细菌或细胞中甘油三酯含量计算:
TG 含量(mg/ mg prot)= (ΔA+0.0199)÷0.6522×V 样÷(Cpr×V 样)=1.533×(ΔA+0.0199)÷Cpr (2)按样本质量计算
TG 含量(mg/ g 鲜重)=(ΔA+0.0199)÷0.6522×V 样÷(W×V 样÷V 样总)=1.533×(ΔA+0.0199)
÷ W
V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入试剂一体积,1 mL;W:样本质量,g; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL。
注意事项:
- 试剂盒中有易挥发性物质,实验过程中需佩戴手套和口罩,试剂瓶盖打开后应该及时盖紧。
- 最低检出限为 100μg/mL。
上海晅科生物科技有限公司
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