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文献和实验
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库存 :100
英文名 :Total antioxidant capacity (DPPH method) test box
CAS号 :无
保质期 :1年
供应商 :上海晅科生物科技有限公司
保存条件 :2-8℃
规格 :50管/48样
总抗氧化能力(DPPH 法)试剂盒
分光光度法 50T/48S
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。研究意义:
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理:
DPPH 为稳定的自由基 ,溶于甲醇、乙醇等极性溶剂中,在 515nm 处有最大吸收。向 DPPH 溶液中加入抗氧化剂时,会发生脱色反应,因此可用吸光度的变化并以 Trolox 作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。自备实验用品:
恒温水浴锅、低温离心机、分光光度计、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。试剂组成和配制:
提取液:液体 60mL×1 瓶,使用前预冷。试剂一:液体 60mL×1 瓶,避光保存。样品的制备:- 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品
10min,取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定,也可以-80℃冻存(不宜超过
30 d)后再测定。
- 组织样品
提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
- 细胞样品
1mL 提取液),冰浴超声波破碎(功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);10000g,
4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
相关图片:
操作步骤:
1、 分光光度计预热 30min,调节波长至 515nm。2、操作表(在 EP 管中反应)
空白管 | 测定管 | |
提取液(μL) | 50 | |
样品(μL) | 50 | |
试剂一(μL) | 950 | 950 |
充分混匀,室温避光反应 20min,于 1mL 玻璃比色皿测定 515nm 吸光值,△A= A 空白-A 测定 |
总抗氧化能力计算公式:
1、以自由基清除率表示:
DPPH 自由基清除率(%)=(A 空白-A 测定)÷A 空白×100%2、以标准曲线上获得的抗氧化剂 Trolox 的量表示:
标准曲线:y = 1.4144x - 0.0081 R2 = 0.9977 x:Trolox 浓度(μmol/mL)y:吸光值差值△A
单位定义:用从标准曲线上获得的抗氧化剂Trolox 的量来表示样本的DPPH 自由基清除能力。
- 按样本质量计算
=0.707×(△A+0.0081)÷W
- 按样本蛋白浓度计算
=0.707×(△A+0.0081)÷Cpr
(3) 按细胞计算
总抗氧化能力(μmol Trolox/104cell)=(△A+0.0081)÷1.4144×V 样÷(V 样÷V 样总×细胞数量(万个))
= 0.707×(△A+0.0081)÷ 细胞数量(万个)
- 按液体体积计算
=0.707×(△A+0.0081)
V 样总:加入提取液体积,1 mL;V 样:反应中样品体积,50μL;W:样品质量,g;Cpr: 样本蛋白浓度,mg/mL
注意事项:
- 尽量避免使用在酸性条件下呈红色或接近红色的试剂,否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。
- 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。
- 若液体样本为碱性,需要用提取液稀释至酸性后再检测。
上海晅科生物科技有限公司
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