GoldenStar® T6 Super PCR Mix Ver.2(1.1×) 金牌 Mix Ver.2 /PCR系列/金牌Mix升级版，耐脏性更强，产量更高/擎科生物TSINGKE

价格： ￥450

品牌：擎科生物品牌认证

货号：TSE102

产品详情

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库存：充足

英文名：GoldenStar® T6 Super PCR Mix Ver.2(1.1×) 金牌 Mix Ver.2

供应商：北京擎科生物科技股份有限公司

保存条件：-25~-15℃保存2年，干冰运输。

规格：5×1.125 mL

GoldenStar® T6 Super PCR Mix Ver.2(1.1×)
金牌 Mix Ver.2

金牌Mix升级版，耐脏性更强，产量更高

【产品简介】
金牌Mix Ver.2是金牌Mix(green)（目录号：TSE101）的升级版，其中包含的DNA Polymerase由基因工程改造GoldenStar T6 DNA Polymerase所得，该聚合酶由Pyrococcus酶与一种具有增强持续合成能力的结构域融合而成，其扩增错配率是野生型Taq DNA聚合酶的1/30。本产品中添加了独特的解抑制因子，配合优化后的反应缓冲液，使得其在扩增不同类型模板时表现出很好的兼容性。
本产品同时具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，扩增产物为平末端，适用于基因克隆等对保真性要求较高的实验。本产品包含DNA Polymerase、dNTPs以及优化的反应缓冲液，浓度为1.1×，使用时无需额外添加双蒸水补充体系，只需加入引物和模板即可进行扩增。产品中包含上样缓冲液，不包含核酸染料，扩增产物无需额外添加loading buffer即可直接点样电泳。

【产品特点】
极强的扩增能力与保真性；
添加特异性增强因子，扩增产物具有高特异性；
适用于高GC模板的扩增。

【适用范围】
适用于基因组、cDNA、噬菌体、质粒等DNA模板的扩增，可用于基因克隆等对保真性要求较高的实验。

【产品组成及保存】
-25~-15℃保存条件保存2年，干冰运输。

组分	规格
1.1×金牌Mix Ver.2	5 × 1.125 mL

【注意事项】
请使用高质量模板；
请勿使用dUTP和含有尿嘧啶的引物与模板；
本产品不推荐用于菌落或菌液扩增，如有需要推荐使用我公司菌P专用PCR Mix（目录号：TSE005）；
PCR Mix应避免反复冻融，短期内多次使用可置于2~8℃保存。使用前，Mix解冻后应充分混匀。

【操作流程】

1. 推荐PCR反应体系

组分	25 µL体系	50 µL体系	终浓度
1.1 × 金牌Mix Ver. 2^a	22 µL	45µL	1×
10 µM 上游引物	1 µL	2 µL	0.4 µM
10 µM 下游引物	1 µL	2 µL	0.4 µM
模板DNA^b	1 µL	1 µL

a. 推荐使用50 µL扩增体系；金牌Mix Ver.2用量至少占总反应体积的80%。
b. 模板推荐量：
试剂盒提取的基因组DNA：50~200 ng；
CTAB法提取的基因组DNA：100~500 ng；
质粒和噬菌体：0.05~1 ng；
cDNA：推荐将反转录产物原液稀释5~10倍后，取1 µL作为模板。
如果模板浓度较低，模板用量可在1~3 µL范围内调整。
过量的模板会导致非特异性扩增，过少的模板易导致PCR扩增效率低。

2. 推荐PCR反应程序

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	2 min	1
变性	98℃	10 s	30~35 cycles^c
退火^a	Tm+3~5℃	10~15 s
延伸^b	72℃	20 s/kb
终延伸	72℃	1~5 min	1
保存	4~12℃	∞

a. 退火温度：参考引物Tm值，建议退火温度设置为引物中Tm较小值+3~5℃；
b. 延伸时间：延伸速度为20 s/kb时可以满足大部分模板扩增需要，若模板复杂，可以将延伸时间增加至30 s/kb；
c. 扩增循环数：30个循环可满足大部分扩增需要，循环数过多易导致非特异性扩增增加，但若扩增条带较弱，可将循环数增加至35~40个

【问题讨论】
Q1：如何验证是否为PCR酶或是模板本身导致的序列突变？
A1：若为单克隆测序突变，以测序质粒为模板重新做扩增，检测是否再次发生突变。若扩增再出现突变为酶导致，若没有发生突变，则代表不是酶导致，而是原始模板本身存在突变导致。
若为其他类型模板测序后发生突变，可用二次PCR扩增来验证，如果同样的酶同样的模板重复扩增，总是在一个位置突变，说明原始模板本身存在突变导致。如果同一模板同一引物不同酶扩增，在同一位置突变，则也是模板本身存在突变导致。反之，则为PCR酶导致的突变。

Q2：PCR扩增没有出现目的条带的原因？
A2：分析PCR反应的每一个关键环节
1）模板：
a．模板纯度差，含有杂蛋白质，盐离子等，选择质量可靠的提取试剂，重新提取高纯度基因组模板。
b．含有尿嘧啶抑制高保真酶的活性，或含有Taq酶抑制剂。
c．模板浓度过高，或含buffer，抑制PCR扩增；若模板为cDNA，建议稀释10~100倍后使用
d．靶序列发生突变或缺失，影响引物与模板特异性结合，或因靶序列某段缺失使引物与模板失去互补序列，导致PCR不能有效扩增。
2）引物：其设计及质量是PCR扩增成败的关键。
a．引物设计不合理，如引物长度不够、引物之间形成二聚体等，需要重新设计引物。
b．合成高质量、高纯度级别的引物。
c．引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期4℃保存，导致引物降解失效。
3）PCR条件：
a．PCR扩增条件：变性温度低、变性时间短都有可能出现扩增无产物；退火温度过低，可导致非特异性扩增而降低特异性扩增效率；退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。
b．反应体系：反应体系配制错误，建议重复实验。
4）酶失活，建议更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或活性降低而导致没有产物；酶扩增效率低，建议更换扩增效率高的酶。

Q3：金牌在-20℃，有时部分冻不上？
A3：为了保护DNA聚合酶的活性，在金牌mix里添加了保护剂。如果mix没有混匀，那么低温下水结冻而保护剂没有结冻，就出现了冻不匀的现象。

本试剂产品仅供科学研究或进一步生产使用,不可用于临床诊断或治疗。