非蛋白巯基测定试剂盒

分光光度法 50 管/24 样

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能，对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。

测定原理

巯基基团与 5,5’- 二硫代-双-硝基 甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处有最大吸收峰。

自备实验用品

天平、研钵、可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL 玻璃比色皿、乙醇和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体 50 mL×1  瓶，4℃保存。试剂一：液体 40 mL×1  瓶，4℃保存。试剂二：液体 2mL×1 瓶，4℃避光保存。样品的制备

1. 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g  组织，加入

1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

1. 血清，培养液：取 0.1mL 样本，加入 0.4mL 提取液，混匀，室温静置 10min, 然后 8000g， 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

操作步骤

1、分光光度计预热 30min，调节波长至 412nm，双蒸水调零。
2、操作表
在 1mL 玻璃比色皿中加入如下试剂

	对照管	测定管
样品（μL）	200	200
试剂一（μL）	750	750
试剂二（μL）		50
乙醇（μL）	50
混匀，25℃静置 10min， 测定 412nm 吸光值，ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管设一个对照管。

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计算公式

非蛋白巯基标准曲线：y =3.6222 x- 0.0037，R2 = 1，x 为标品浓度，单位 μmol/mL， y 为吸光度ΔA。

1. 组织：

1. 按样本重量计算

非蛋白巯基含量（μmol/g 鲜重）=（ΔA+0.0037）÷3.6222 ×V 样总÷W
=0.276×（ΔA+0.0037）÷W

1. 按样本蛋白浓度计算

非蛋白巯基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷3.6222×V 样总÷Cpr
=0.276×（ΔA+0.0037）÷Cpr

1. 血清、培养液：

非蛋白巯基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷3.6222×5 ×103