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文献和实验
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库存 :100
英文名 :Xanthine Oxidase (XOD) Kit
CAS号 :无
保质期 :1年
供应商 :上海晅科生物科技有限公司
保存条件 :2-8℃
规格 :50管/48样
黄嘌呤氧化酶(xanthione oxidase, XOD)试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
XOD(EC 1.17.3.2)催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子,是活性氧主要来源之一;同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD 主要分布于哺乳动物的心,肺,肝脏等组织中,当肝功能受损时,XOD 大量释放到血清中,对肝损害的诊断具有特异性的意义。
测定原理:
XOD 催化黄嘌呤产生尿酸,尿酸在 290nm 下有特征吸收峰。需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存; 试剂一:60mL×1 瓶,4℃保存; 试剂二:粉剂×4 瓶,4℃保存。粗酶液提取:1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量
(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
相关图片:
操作步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 290nm,蒸馏水调零。2、 XOD 检测工作液的配制:用时在每瓶试剂二中加入 15mL 试剂一,充分混匀,现配现用;
3、测定前将XOD 检测工作液 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min。
4、取 1mLXOD 检测工作液于 1mL 石英比色皿中,再加入 35μL 样本,混匀,室温下立即测定 290nm 下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1。
XOD 活性计算:
1、血清(浆)XOD 计算:
单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=2424×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 XOD 计算:
- 按样本蛋白浓度计算:
XOD(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr)÷T =2424×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算:
XOD(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=2424×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算:
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