2×Lab FL PCR MasterMix

保存条件 ：-20℃

供应商 ：LABLEAD

规格 ：5ml

产品货号：FL0201
储存条件：-20°C 保存2年。短时间（1个月内）使用可以置4°C。
产品说明
本产品包含Lab LastLong DNA Polymerase、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×。 使用时只需加入模板、引物，并补足水至Mix终浓度为1×即可。本制品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。PCR产物为3，端带A头，纯化后可直接用LABLEAD LabpO TOPO TA系列载体（货号：PA0101、PA0102）克隆。
产品特点
1、超快的扩增速度：延伸速度可以达到5-10sec/kb，最短半小时完成PCR。
2、突出的长片段扩增能力：可扩增高达10kb的长片段（包括人类基因组此类的复杂模板）。
3、良好保真性：保真度是taq的3倍以上。
4、强大的扩增能力：产量高，对于一些有特殊结构的复杂模板和GC含量高模板有良好效果。
建议PCR 体系设置

Component	25 μl Reaction	50 μl Reaction	Final Concentration
2x Lab FL PCR mix	12.5 μl	25 μl	1 ×
Forward Primer(10 μM)	0.5 μl	1 μl	0.2 μM
Reverse Primer(10 μM)	0.5 μl	1 μl	0.2 μM
Template DNA	as required	as required
ddH2O	up to 25 μl	up to 50 μl

参考模板用量（50 μl反应体系）
质粒：0.1-10ng；细菌基因组：10-100ng；人类基因组：50-150ng；cDNA：1-5μl from RT reaction。
建议PCR循环条件

Step	Temperature	Time	Cycle Number
Initial denaturation	94oC	2-3 min
Denaturation	94oC	10 s	25-35 cycles
Annealing	55oC	10-15s
Extension	72oC	10 s/ kb
Final Extension	72oC	1-5 min
	4-8oC	Hold

注意事项
1.本品扩增速度极快， 质粒和简单基因组等简单模板可以尝试5s/kb延伸速度并采用减少循环数以进一步缩短PCR时间；长片段（大于等于3kb）或者复杂模板产量较低应采用15-20s/kb延伸速度或者采用较多循环数。
2.Lab FL产量较低时可尝试采用较长的延伸时间（如20s/kb）和循环数（如35个）可以提高产物产量。
3.对于GC含量很高的模板，短片段预变性和变性温度可以提高到98 ^oC和/或适当延长变性时间。长片段为了避免DNA损伤不应该提高变性温度，应该适当延长预变性时间到5min.，变性时间可以延长5-10s。
4.如果扩增模板GC含量高或者模板复杂扩增效果不佳时，可在反应混合物中加入DMSO到终浓度1%-8%，按照1%梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1.0-1.7 M。并采用降落PCR（Touchdown PCR）