蛋白快速银染试剂盒

规格 ：20T

蛋白快速银染试剂盒

货号：P1027-20T
存储条件：常温，6个月有效

产品简介：
蛋白快速银染试剂盒是一种快速的可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白银染染色的试剂盒，该试剂盒含有增敏步骤，可明显降低背景。其优点还在于：1、操作简单快速；2、用于2D凝胶的银染，并可进行后续的质谱检测；3、目的条带清晰：4、不含甲醇。
蛋白快速银染试剂盒操作速度更快。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

名称	规格	存储条件
试剂A：Silver Stain Sensitizer(500x)	2x1ml	常温
试剂(B): Silver Stain (100 x)	10ml	常温，避光
试剂(C)：Silver Stain Developer(5x)	2x100ml	常温，避光
试剂(D)：Silver Stain Stop Buffer(10x )	100ml	常温

自备材料：
1、水平摇床或侧摆摇床
2、去离子水（超纯）
3、乙醇、冰乙酸

操作步骤(仅供参考)：
1、准备工作：以下操作以 8.5x5.5cm、 厚度为 1.0mm 的凝胶为例，以凝胶全部浸没到溶液为准，一股用量是 25ml，对于凝胶体积较大的，各溶液的使用量需按凝胶体积比例放大。整个银染过程应在摇床上进行，摇床转速控制在 60~70rpm。提前配制固定液即按无水乙醇冰乙酸;去离子水=5-1:4的比例配制。提前配制洗涤液，即按无水乙醇;去离子水=1:4的比例配制。
2、水洗：电泳结束后，取凝胶放入去离子水中清洗2次，每次5min.
3、固定：取凝胶放入50~100ml 固定液中，在摇床上室温摇动 15~20min，重复固定步骤1次。
4、洗脱：取凝胶放入洗涤液中清洗2 次，每次 5min。
5、水洗：去离子水清洗凝胶2次，每次 5min。
6、增敏：配制银染增敏工作液，即取 Silver Stain Sensitizer(500 x)0.1ml 加入到 50ml去离子水中，混匀，即为 1×Silver Stain Sensitizer，一般应 2h 内用完。室温下用 1xSilver Stain Sensitizer 育凝胶 2min，立即用去离子水清洗凝胶2次，每次1min。
7、银染：配制银染工作液，即取Silver Stain(100 x)0.5m1 加入到50ml 去离子水中，混匀，即得 1× Silver Stain，一般应 2h 内用完。 取凝胶入 1 xSilver Stain， 在摇床上室温摇动 10~20min。
8、水洗：弃液，在摇床上用去离子水清洗凝胶 2 次，每次 30s， 摇动速度在 60~ 70rpm总的水洗时间应控制在 1.5min 内。
9、显影：配制银染显影工作液，即取 Silver Stain Developer(5x)10ml 加入到 40ml 去离子水中，混匀，即为 1x Siver Stain Developer,一般应30min内用完。清洗凝胶后，立即置于 1x Silver Stain Developer 中，室温聯育2~10min，直至蛋白条带清晰可见。
般显色305/后就会出现棕色沅淀，继续显影 2-3min， 亦可延长至 5min 以上，如果显影效果不佳，可重新更换 1xSilver Stain Developer继续显影。
注意事项
1、背景过深：①显色时间过长；②洗涤不充分：③凝胶中残留物质未去除干净；④去离子水的纯度过低！
2、蛋白条带较浅：①蛋白的半胱氨酸含量过低：②银染后水洗时间过长：③蛋白量较低;④固定后的洗涤时间不够，导致乙酸残留。
3、凝胶上出现杂质或非蛋白的印迹：①凝胶没有被充分漫没，应加入足量溶液：②容器没有清洗干净；③凝胶接触金厲物质；④指纹或其他压迹。