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文献和实验
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库存 ：100
供应商 ：普健生物（武汉）科技有限公司
检测方法 ：本试剂盒采用间接ELISA分析技术，将S蛋白预先包被在酶标板上，之后将阳性对照样本和分析样本分别加入到微孔中，样本中S抗体会和预包被的S蛋白结合，清洗掉未结合的物质，再加入生物素标记的抗人IgA抗体，清洗掉未结合的抗体，再加入HRP标记的链酶亲和素，清洗掉未结合的酶，将显色底物溶液添加到微孔中显色，显色强度与样本中S抗体IgA浓度成正比。 本试剂盒用于测定血清和血浆中S抗体IgA的浓度。
应用 ：本试剂盒用于测定血清和血浆中S抗体IgA的浓度。
适应物种 ：人
样本 ：人血清
规格 ：96T
本试剂盒用于测定血清和血浆中针对S蛋白的IgA抗体的浓度。
试剂盒按推荐温度保存6个月，信号强度降低小于 10%。
• 450 nm滤光片酶标仪，含540 nm或570nm校正波长更佳
•单道或多道微量移液器，移液器枪头
•去离子水
• 500 mL量筒
•样品稀释管或不同规格EP管
•吸水纸
样品收集和储存
1） 血清：全血室温放置60分钟或4℃过夜，然后1000 x g离心15分钟，取上清检测，或分装后于≤-20℃冰箱保存，避免样品反复冻融。
2） 血浆：使用EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆，样品采集后30分钟内1000 x g离心15分钟，取上清检测，或分装后于≤-20℃冰箱保存，避免样品反复冻融。
试剂准备
使用前将所有试剂和标本置于室温平衡。
浓缩清洗液: 如果浓缩液中有晶体析出，加热至室温并轻轻混合，直到晶体完全溶解，25mL浓缩清洗液使用离子水定容至500mL，得到清洗工作液。
阳性对照标准品：阳性对照浓度为32ug/mL，使用样本稀释液1:2000稀释阳性对照得到第一个标准点16000pg/mL，依次进行倍比稀释操作得到共计7个标准点16000pg/mL 、8000pg/mL 、4000pg/mL、2000pg /mL、1000pg/mL、500pg /mL、250pg /mL、最后再以100ul样本稀释液为零标准（0 pg/mL），共计8个标准点，建议每个标准点至少做2个平行孔
血清，血浆样本：推荐血清，血浆使用样本稀释液1:1000~1:5000稀释后上样。如果样本检测值超出标准曲线范围，可适当调整稀释倍数并重新测定，或预估样本中抗体浓度，在实验之前预先稀释数个梯度同时进行测定。
检测溶液A：震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，临用前取合适体积用检测溶液稀释液1:2000稀释至工作浓度。
检测溶液B：震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，临用前取合适体积用检测溶液稀释液1:2000稀释至工作浓度。
显色液: 避光保存，显色时100μL /孔。
终止液：显色完毕后50μL /孔。
使用前将所有试剂和样品置于室温。建议对所有标准品、对照品和样品进行一式两份的分析。
1. 按照前面章节的指示准备所有试剂和准备工作。
2. 从板架上取下多余的微孔板条，将其放回装有干燥剂包的箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。
3. 每孔加入100μL 稀释好的阳性对照标准品（共计8点）和稀释好的待测样本，用封板膜封住，37℃孵育60分钟。
4. 弃去孔内液体，每孔加入 300μL的清洗工作液，轻微震荡后弃去孔内液体，将酶标板倒扣在吸水纸上轻拍，使残留在孔内的液体全部去除，重复洗板 3 次，此过程也可采用尖嘴喷射瓶，多道移液器或自动洗板机来完成。
5. 每孔加入100μL检测溶液A工作液（生物素标记），用新的封板膜封住，37℃孵育60分钟。
6. 重复步骤4中的洗板程序。
7. 每孔加入100μL检测溶液B工作液（HRP标记），用新的封板膜封住。37℃孵育30分钟。
8. 重复步骤4中的洗板程序。
9. 每孔加入100μL显色液，37℃避光显色10分钟。
10. 每孔加入50μL终止液，孔里的颜色应该由蓝色变至黄色，如果孔内颜色为绿色或颜色变化不均匀，轻轻震动酶标板板使颜色均一。
11. 擦干酶标板底部水气，立刻用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度值（O.D.值），如果波长校正可用，则设置为540 nm或570 nm，如果波长校正不可用，则从450 nm的读数中减去540 nm或570 nm的读数，这种修正可去除酶标板读数中的光学偏差，如果没有校正波长，可直接读取450 nm的读数，但读值有可能会更高、更不准确。
标准曲线制作
取每个阳性对照和样本的复孔平均值O.D.，减去零标准孔平均值O.D.后，以阳性对照的浓度为横坐标，O.D.值为纵坐标，绘出标准曲线（R2值越趋近于1曲线越精确），然后再将样品的平均值O.D.带入标准曲线的回归方程式，计算出样品中目标蛋白浓度。
如果样品已经稀释，从标准曲线上算出的浓度须乘以稀释系数，即为样品的实际浓度。
检测范围
250pg/mL—16000pg/mL
最低检测限(MDD)
200pg/mL
MDD是测试20个零标准（稀释液）的平均O.D.值上加两倍标准差后计算相应的浓度来确定的。
精密度
批内差： CV<12%
批间差： CV<15%
稳定性
试剂盒按推荐温度保存6个月，信号强度降低小于 10%。
实验细节说明
1. 在试剂盒标签上的有效期内使用，不要与其他厂家的试剂盒混合使用。
2. 如果样本检测值超出标准曲线范围，可适当调整稀释倍数并重新测定，或预估样本中抗体浓度，在实验之前预先稀释数个梯度同时进行测定。
3. 为避免交叉污染，不同标准品、样本、试剂的加样需更换移液枪头，每管试剂使用单独的容器储存。
4. 在孵育过程中贴紧封板膜。
5. 显色液避光保存，临用前15分钟从冰箱取出在室温平衡。
6. 浓缩清洗液（20×）需使用去离子水1：20稀释至工作浓度，去离子水不包含在试剂盒中，需实验人员自备。
7. 终止液为酸性溶液，具有轻微腐蚀性，使用时避免接触皮肤、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接触，使用大量清水冲洗后观察接触部位反应，如情节严重请及时就医。
8. 试剂盒酶标板条可按需拆卸使用，已开封的试剂盒建议在1个月内使用，未开封的试剂盒所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存，收到试剂盒后请将阳性对照、检测溶液 A、检测溶液 B、以及预包板保存于-20℃，其余试剂请置于 4 ℃保存备用。
常见问题解决指南
| 问题 | 原因 | 解决方案 |
| 标准曲线差 | 移液不精确 | 检查和校正移液器 |
| 标准品准备不正确 | 进行正确的标准品梯度稀释 | |
| O.D 值低 | 孵育时间太短 | 保证充足的孵育时间 |
| 温度不正确 | 试剂平衡至室温并保证孵育温度正确 | |
| 试剂体积不正确 | 检查移液器并确保加样体积与说明书一致 | |
| 精密度低 | 移液不精确 | 检查和校正移液器 |
| 混匀不充分 | 充分混匀和吸取试剂 | |
| 洗涤不充分 | 按说明书要求充分洗涤和浸泡 | |
| 背景值高 | 洗涤不充分 | 按说明书要求充分洗涤和浸泡 |
| 清洗液污染 | 重新配置清洗液 | |
| 灵敏度低 | 试剂盒储存不当 | 试剂盒短期整体保存于4℃，长期保存根据说明书分开保存各组分 |
样品清单及储存条件
| 样品名称 | 规格 | 描述 | 推荐储存条件 |
| 预包板 | 1 板 | 96孔聚苯乙烯微孔板（12条*8孔），预包被S蛋白。 | 密封状态放置于-20℃保存。 |
| 阳性对照 | 1瓶 | 12μL 针对S蛋白重组人源IgA抗体，浓度32ug/mL。 | 放置于-20℃ 保存。 |
| 检测溶液A | 1 瓶 | 12μL 生物素标记的抗人IgA二抗，临用前用检测溶液稀释液1:2000稀释至工作浓度。 | 放置于-20℃ 保存。 |
| 检测溶液B | 1 瓶 | 12μL HRP标记的链酶亲和素，临用前用检测溶液稀释液1:2000稀释至工作浓度。 | 放置于-20℃ 保存。 |
| 样本稀释液 | 1 瓶 | 25 mL稀释液（含防腐剂），用于阳性对照、血清、血浆的稀释。 | 放置于4℃ 保存。 |
| 检测溶液稀释液 | 1 瓶 | 25 mL稀释液（含防腐剂），用于检测溶液A，检测溶液B的稀释。 | 放置于4℃ 保存。 |
| 浓缩清洗液 | 1 瓶 | 25 mL （20×）浓度的清洗液（含防腐剂），临用前用去离子水1:20稀释至工作浓度。 | 放置于4℃ 保存。 |
| 显色液 | 1 瓶 | 12 mL TMB。 | 放置于4℃ 保存。 |
| 终止液 | 1 瓶 | 6 mL 2M 酸液。 | 放置于4℃ 保存。 |
| 封板膜 | 4 片 | 用于实验中封闭酶标板。 | 放置于常温保存。 |
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