产品详情
文献和实验
相关推荐
库存 :20
细胞类型 :见详情说明
品系 :见详情说明
组织来源 :见详情说明
相关疾病 :见详情说明
物种来源 :大鼠
免疫类型 :见详情说明
细胞形态 :贴壁/悬浮
器官来源 :见详情说明
运输方式 :常温/干冰运输
年限 :见详情说明
生长状态 :优良
规格 :5×105cells/T25培养瓶
原代细胞复苏基本技术:一、从液氮容器中取出原代细胞冻存管后,立即将细胞冻存管直接浸入37℃水浴中,在1-2分钟内摇动细胞冻存管至冻存的细胞融化。
二、用75%酒精消毒细胞冻存管后,小心打开盖子,用吸管吸出细胞悬浮液,接种到细胞培养瓶中,5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养。
三、12小时后,更换一次原代细胞培养液(全部液体),继续在5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养 。
注意事项
一、将冻存管从液氮容器中取出时,要做好防护工作,以免冻伤。
二、取冻存管后立即放入37oC水浴中,缩短解冻时间。
三、复苏最好用新配制的原代细胞培养体系。
原代细胞传代基本技术:
一、选用原代细胞生长状态好(90-95%),生长数量大于5×105进行传代。
二、吸除原代细胞培养液。用含双抗的1×PBS(pH7.4)清洗细胞培养瓶2次。
三、3ml细胞消化液加入细胞培养瓶,轻轻摇动,使细胞消化液覆细胞培养瓶底。
四、细胞培养瓶置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养2分钟后,在显微镜下观察原代细胞的消化状态。(平滑肌细胞建议只消化30s)
请记住:如贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后,用手指轻轻拍打细胞培养侧部至大部分贴壁细胞悬浮,加入3ml血清终止液,终止细胞消化。每种原代细胞的消化时间是有差异的。
五、吹打培养瓶中悬浮细胞若干次,再吸出细胞悬浮液,转入15ml离心管中,1000rpm离心5分钟。
六、弃离心管中液体,加入原代细胞培养液重悬细胞。细胞计数,确定细胞数量。
七、细胞分瓶后,加入适量原代细胞培养液至细胞培养瓶中,置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养24小时。
原代细胞冻存基本技术:
一、选用原代细胞生长状态好(90-95%),生长数量大于5×105进行冻存。
二、原代细胞冻存24小时,须换液新鲜原代细胞培养液一次。
三、贴壁的原代细胞需常规用0.25%胰酶消化,将消化后的细胞悬液收集至细胞离心管中。
四、细胞离心管在1000rpm下离心5分钟,小心弃清液。
五、将细胞冻存液加入细胞离心管中,悬浮细胞。细胞计数调整至5×105/ml。
六、将悬浮细胞放置细胞冻存管中。密封细胞冻存管。 标明细胞种类和冻存日期。
请记住:封口一定要严,否则复苏时易出现爆裂。
请按下列顺序降温保存原代细胞:室温→4℃(60 分钟)→ 冰箱冷冻室(60 分钟)→ 超低温冰箱(-80℃过夜)→ 液氮。
原代细胞冻存液常用配方:50%完全原代细胞培养液(不含有血清、添加剂、双抗)+ 40%胎牛血清 + 10%DMSO
原代细胞免疫荧光鉴定:
一、原代培养的细胞用 4%的多巨甲醛,室温固15 min,0.1% Triton-X-100 透膜 10 min,PBS 清洗 3 遍,每5 min,
二、山羊血清室温封闭45 min,一抗 Insulin,兔多抗,使用浓度 1 ∶ 50;Glucagon 抗体,鼠单抗,使用浓度 1 ∶ 200;
Pancreatic Polypeptide(pp)抗体,兔多抗,使用浓度1∶200,4 ℃孵育过夜,PBS 清洗 3 遍,每次 5 min,
三、加入相应的二抗 Alexa Flour 594 (山羊抗兔)或FITC(山羊抗小鼠),室温避光孵育 45 min,PBS
清洗 3 遍,每次 5 min,
四、DAPI 复染核,PBS 清洗 3遍,每次 5 min,普通荧光显微镜下观察并照相.
五、实验结果:
Insulin(200X):图中红色荧光为Insulin阳性,阳性率>90%,即:细胞纯度>90%
原代细胞培养客户须知:
一、请客户收到本公司原代细胞产品后,立即对物品包装、细胞培养瓶等拍照,如有疑问或问题,须在24小时内通知本公司,提供照片和书面说明。
客户收到非冻存原代细胞后,请将原装的原代细胞瓶放入细胞培养箱内培养,4-12小时后再使用。75ml培养液含添加剂,血清及双抗,可吸出70ml左右直接使用,无需过滤。注意观察细胞情况,待贴壁率达到90%以上再按传代说明操作。
二、请客户使用T25细胞瓶传代,一瓶传二瓶。
三、谨记:培养原代细胞前三天,需对原代细胞生长状态进行拍照并注明和标记时间。若原代细胞培养生长存在质量问题,需向本公司提供原代细胞培养生长的照片和书面说明。
四、请客户使用原代细胞第3代以内。原代细胞培养传代过多,可能造成原代细胞的质量问题。
本产品仅用于科学研究使用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用
上海博尔森生物科技有限公司
实名认证
钻石会员
入驻年限:4年