His 标签蛋白 纯化凝胶

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供应商 ：上海圣尔生物科技有限公司

规格 ：50 ml/25ml/10ml

圣尔生产的His标签蛋白纯化凝胶可以兼容还原剂和螯合剂，并能简单、快速、高效并且高特异性地纯化His标签蛋白的试剂盒。
试剂盒提供了His标签蛋白所需的相关试剂和亲和层析柱空柱管，为His标签蛋白的纯化带来了极大的便利。
通常带有6个组氨酸标签的重组蛋白(6xHis-tagged recombinantprotein)或带有6个以上连续组氨酸标签的重组蛋白，被称为His标签蛋白。蛋白样品溶液通过His标签蛋白纯化凝胶时，重组蛋白His标签上的组氨酸残基能特异性地结合His标签蛋白纯化凝胶中的镍离子上，其它蛋白则不能被结合。洗涤后，His标签重组蛋白可在非变性条件下被洗脱，从而被分离纯化。
His标签蛋白纯化凝胶对His标签重组蛋白的亲和力强、选择性高、结合容量大，可以获得高纯度的His标签重组蛋白，可用于简单、快速、高效地纯化细菌、哺乳动物细胞、昆虫及杆状病毒等多种表达系统中表达的His标签重组蛋白。纯化的蛋白可以用于结构和功能研究、抗体制备、蛋白与蛋白相互作用、蛋白与核酸相互作用等方面的研究。
His标签蛋白纯化凝胶采用了一种高度交联的6%琼脂糖凝胶(Sepharose CL-6B)为基质，并使用了进一步优化的接臂和镍离子螯合技术，和目前市售的大多数Ni-IDA agarose或类似产品相比，非特异性蛋白结合显著降低，耐受压力强，镍离子螯合非常稳定。和同类产品相比，本产品由于镍离子基本不会流失，重复使用本纯化介质时不需要重新装载镍离子。
Ni-IDA agarose以及绝大多数类似的镍柱产品不能耐受



蛋白样品中常见浓度的还原剂如二硫苏糖醇(DTT)、β-巯基乙醇等以及常见浓度的螯合剂如EDTA等，但His标签蛋白纯化凝胶可以很好地耐受DTT等还原剂以及EDTA等螯合剂。本产品可耐受20mM DTT等还原剂，以及20mM EDTA等螯合剂。这为需要添加还原剂或螯合剂的蛋白样品的纯化提供了可能性。本产品不兼容8M尿素和6M盐酸胍。对于包涵体蛋白的纯化，在采用8M尿素或6M盐酸胍溶解蛋白的情况下，需要通过透析去除尿素和盐酸胍后才能使用本产品进行His标签蛋白的纯化。
His标签蛋白纯化凝胶已经螯合了镍离子，呈蓝色，凝胶的颗粒直径为45-165 μm。可耐受的最大压力为0.025 MPa，约合5.8 psi。采用固定流速进行蛋白纯化时的推荐流速为0.5 ml/min。
His标签蛋白纯化凝胶可以高容量、高特异性地结合His标签蛋白。最大蛋白结合量为20-30 mg蛋白/毫升凝胶。实际使用时的最大结合量取决于待纯化的His标签重组蛋白的分子量大小，分子量越大则最大结合容量越大，分子量越小则最大结合容量越小。对于分子量为50kD的蛋白，每毫升凝胶的实际最大纯化量约为6-10 mg，对于分子量为100 kD的蛋白，每毫升凝胶的实际最大纯化量约为12-20 mg。但对于分子量相同的蛋白，也会因为蛋白本身特性的不同，结合的最大容量也会有所不同。
His标签蛋白纯化凝胶储存在20%乙醇中，10 ml总体积中5 ml为凝胶，5 ml为液体，需要充分重悬后再吸取。
一个包装的本产品足够进行10次His标签重组蛋白纯化，每次细菌沉淀的湿重约为1克。每次蛋白的最大纯化量为10-15 mg，具体的最大纯化量和蛋白分子量有关；对于分子量为50kD的带有His标签重组蛋白，每次的蛋白最大纯化量为3-10 mg。在不使用亲和层析柱空柱管的情况下，参考本说明书本试剂盒足够进行500次的小量His标签蛋白纯化。