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文献和实验
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品系 :人源细胞系
ATCC Number :--
细胞类型 :贴壁生长
肿瘤类型 :详询
CAS号 :--
供应商 :厦门逸漠生物科技有限公司
库存 :9999
注册证号 :--
英文名 :T24/DDP
生长状态 :正常
年限 :长期
运输方式 :复苏发货或干冰发货(顺丰快递)
器官来源 :膀胱
是否是肿瘤细胞 :否
细胞形态 :上皮细胞样
免疫类型 :详询
物种来源 :详询
相关疾病 :详询
组织来源 :膀胱
规格 :1*10^6
细胞特性
1) 来源:膀胱;移行细胞癌
2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长
3) 含量:>1x106
4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备MCCOYS 5A培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注:第一次传代推荐传代比例为1:2,以后传代比例可根据客户需要自己决定。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例;
1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
厦门逸漠生物科技有限公司
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