RT-PCR kit 逆转录反转录试剂盒 R1011/R1012

保存条件 ：-20℃

保质期 ：2年

库存 ：大量

供应商 ：东盛生物

规格 ：20次/100次

RT-kit（逆转录试剂盒）

货号 规格 价格

R1011 20次 600

R1012 100次 2500

试剂盒组成：

RT-kit（逆转录试剂盒）

货号 规格

R1011 20次

R1012 100次

试剂盒组成：

组分	R1011（20T）	R1012（100T）
M-MLV（200 U/μl）	20 μl	100 μl
Rnase Ihibitor(40 U/μl)	12 μl	60 μl
Oligo(dt)15 (50 μM)	20 μl	100 μl
Random primer(50 μM)	20 μl	100 μl
5×first-strand buffer	80 μl	400 μl
Rnase-free ddH2O	1 ml	1 ml×5
dNTPs（10 mM each）	50 μl	250μl

产品说明

cDNA第一链合成试剂盒是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的、具有高灵敏度的PT-PCR反应系统。该系统合理配备了与cDNA第一链合成反应相关的各种组分，优化体系

的保证M-MLV具有高效的逆转录酶活性，所得cDNA对后续的PCR或定量PCR实验兼容性好，可用于检测稀有基因的表达、从极少数细胞中定量检测特定mRNA的表达水平、

克隆特定基因的cDNA片段等。

保存条件

试剂盒的各组成成分应在-20℃保存。酶在-20℃可保存1年以上，在0℃可保存3天。

操作步骤:

1. 在冰浴的无菌离心管中加入

1-5 μg总RNA或250-500 ng mRNA，

1 μl Oligo(dt)₁₅ 或Random primer，

补Rnase-free ddH₂O至12.4 μl；

2. 进行变性退火反应

70^oC温浴5 min, 简短离心后冰浴5 min；

3. 依次加入

4 μl 5×first-strand buffer，

1 μl dNTPs（10 mM each），

1 μl M-MLV，

0.6 μl Rnase Ihibitor；

4. 按下列条件进行反转录反应

42 ^oC 温浴60 min （随即引物25 ^oC 温浴10 min ，37 ^oC 温浴60 min）；

5. 终止反应

70^oC 温浴5 min终止反应,置冰上进行后续实验或-20 ^oC 保存。

6. 用RNase-free ddH2O将反应体系稀释到50 μl，取2-5 μl进行PCR扩增反应。

注意事项

1 用于cDNA 合成反应的溶液试剂尽可能用DEPC 进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤

除菌处理。

2 使用简单的RNA纯化方法即可获得满足于RT-PCR反应的RNA，但为了保证实验的成功率，建议使用GTC法制备的高纯度RNA。

3 试剂盒的各组成成分应在-20℃保存，酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放入-20℃保存。

4 为防止RNA降解，应尽量避免反复冻融，有条件的实验室最好保存于-70℃。

5 最佳的PCR反应条件，因PCR扩增仪的不同而不同，所以在使用您的样品之前最好先试做一下control反应，以确定最佳的PCR反应条件。

6 cDNA 产物应置于-20℃保存。