Taq DNA Polymerase PCR聚合酶

Taq DNA Polymerase PCR聚合酶

价格: ¥90 - 1330

品牌:东盛

货号:P1011/P1012/P1012/P1014/P1015

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产品详情

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保存条件 :请置于-20 ℃ 。

供应商 :东盛生物

库存 :大量

规格 :500U/500U+dNTP/1000U/1000U+dNTP/12000U

Taq DNA Polymerase

 

 

产品组分

P1011

Taq DNA Polymerase 5 U/μl 100 μl

10×PCR Buffer(Mg2+ Plus) 1.25 ml

6×Loading Buffer 1 ml

P1012

Taq DNA Polymerase 5 U/μl 100 μl

10×PCR Buffer(Mg2+ Plus) 1.25 ml

dNTPs(各2.5 mM) 1 ml

6×Loading Buffer 1 ml

P1013

Taq DNA Polymerase 5 U/μl 200 μl

10×PCR Buffer(Mg2+Plus) 1.25 ml×2

6×Loading Buffer 1 ml×2

P1014

Taq DNA Polymerase 5 U/μl 200 μl

10×PCR Buffer(Mg2+ Plus) 1.25 ml×2

dNTPs(各2.5 mM) 1 ml×2

6×Loading Buffer 1 ml

P1015

Taq DNA Polymerase 5 U/μl 100 μl×24

10×PCR Buffer(Mg2+ Plus) 1.4 ml×24

 

注:1 Taq DNA聚合酶分为2.5 U/μl与5 U/μl两种包装,可自由选择,如没特别说明提供5 U/μl的包装。

2 10×PCR Buffer分为Mg2+ Plus与Mg2+ Free两种包装,可方便选择。如没特别说明提供10×PCR Buffer(Mg2+ Plus)。Mg2+ Free的 10×PCR Buffer提供25 mM MgCl2

 

保存条件

-20℃保存2年。多次冻融不影响生物学活性。

 

产品说明

Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶,分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb(简单模板)。延伸速度为

0.9~1.2 kb/ min(70~75℃)。该酶具有5’→3’聚合酶活性,无3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3'-dA。

 

产品特点

热稳定性好:95℃下半衰期超过40 min。

PCR产物具有3’-dA,可直接用于T/A克隆。

 

产品用途

常规PCR扩增

DNA标记

DNA测序

制备TA克隆用PCR产物

 

活性定义

一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

 

质量控制

相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置一周,

扩增活性无明显改变。

 

应用举例

注:以下反应举例为50 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。

 

以λDNA为模板,扩增1kb片段。

λ DNA(2.5 ng/μl)         1 μl     

引物1 (10 μM)           2 μl

引物2 (10 μM)           2 μl

10×PCR Buffer        5 μl

dNTPs(2.5 mM)     4 μl

Taq(5 U/μl)       0.25 μl

超纯水         补足至50 μl

 

PCR反应条件

95℃ 3 min

95℃ 30 sec

55~68℃ 30 sec 30 Cycles

72℃ 1 min

72℃ 10 min

 

 

注意事项

1 Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3’末端通常会加上1个多余的腺嘌呤。

2 碱基出错率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5

3 建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果。

4 模板DNA推荐用量(50 μl 标准PCR体系)

人类基因组DNA 0.1 μg ---1 μg

λDNA 0.5 ng---5 ng

质粒DNA 0.1 ng-10 ng

大肠杆菌DNA 10 ng-100 ng

5 如进行PCR扩增后,除目的条带外,还伴随其他杂带,建议适当减少体系中的Taq酶用量,以增加PCR扩增反应的特异性。

 

Q&A

问:东盛Taq DNA聚合酶与国外品牌的Taq DNA聚合酶有什么区别?

答:东盛Taq DNA聚合酶的活性比较稳定,其品质与国外知名公司的产品差异不大。但因酶活性的复杂性,批间产品可能会有差异。在PCR实验过程中,如PCR

扩增产物变淡或无,可适当增加酶的用量;如发现有较强的非特异性扩增,那可减少酶的用量。

 

问:不同批次的Taq DNA聚合酶的活性有没有差异?

答:有一定的差异。为解决这一问题,东盛已经通过Taq DNA聚合酶的规模化生产,减少生产批次,实现产品品质的均一性。

 

问:如何利用Taq DNA聚合酶进行加A反应?

答:由高保真DNA 聚合酶(如Pfu)产生的PCR 扩增片段的纯化产物1-7μl;

加入1μl Taq DNA 聚合酶10×反应缓冲液(含MgCl2);

加入dATP 至终浓度0.2 mM;

加入5 U的Taq DNA 聚合酶;

加超纯水至终反应体积为10μl;

70℃孵育15-30 分钟;

进行TA克隆。

 

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