尼龙毛纤维预装柱

保修期 ：2年

现货状态 ：N/A

库存 ：999

供应商 ：上海曼博生物医药科技有限公司

规格 ：10支/一套

产品简介：

研究人员使用尼龙羊毛纤维分离T细胞和B淋巴细胞已有20多年的历史。在1970年代初期，在M.H. Julius等（1973），Eisen等人（1972），和Greaves＆Brain（1974）发表的文章中有描述在柱子或塑料吸管中使用尼龙羊毛纤维的条件。这些操作流程对T细胞回收率达到50-90％，B细胞去除率达到10-100倍。

早期的研究人员发现，在分离技术之前，有必要擦洗或洗涤尼龙羊毛纤维。这种预洗涤可以清除纤维表面的所有表面毒素，并可以改善分离后细胞的活力。 Polysciences提供的尼龙羊毛纤维已完成这一预洗涤过程。 Polysciences可以提供10g和50g的散装尼龙羊毛纤维（18369），可将其包装到色谱柱中并高压灭菌后使用。

Polysciences还提供预包装的尼龙羊毛纤维色谱柱。采用Becton Dickinson的一次性的10cc塑料注射器，预装0.5g的尼龙毛纤维。该包装还带有起控制作用的单向旋塞阀。一套包含10支预装柱（catlog:21759）。




产品特点：

•      单次纯化可将B细胞比例降低至<3.0％，而通过第二根色谱柱再次回收可将B细胞比例降低至<0.5％
•      <0.5％的B细胞占比可以通过装有1g尼龙羊毛纤维，承载5 x 107个细胞的色谱柱的
一次纯化来实现，但此方法应用于T细胞的产量不如较小色谱柱上的二次纯化
•      B细胞对尼龙羊毛纤维的粘附是一个活化过程，与37°C相比，在20°C或4°C时活性降低
•      尼龙羊毛纤维分离得到的细胞产物基本不含粘附细胞，死细胞和细胞碎片
•      据报道，从尼龙羊毛中分离出的1g细胞内阳性细胞的产率高达90％

产品应用领域：

使用尼龙羊毛纤维分离T细胞和B淋巴细胞

使用方法：

细胞分离流程：

1.     从包装中取出注射器和柱塞。取出旋塞阀，安装在注射器的鲁尔接头处。
2.     在37°C下用特定的培养基洗涤预装的羊毛柱。在清洗羊毛柱时轻轻拍打，以确保羊毛湿润且无气泡。建议的培养基包括含有5％热灭活胎牛血清（FCS）的Dulbecco PBS，含有10％FCS的Hank平衡盐溶液（HBSS），含有10％FCS的RPMI-1640，含有10％FCS的Earle's Saline（ES）培养基，含10％FCS的Mc Coy's 5a培养基。
3.     关闭旋塞阀，将制备好的羊毛柱在37°C下孵育1小时。
4.     打开旋塞阀，将培养基排出，然后关闭旋塞阀。
5.     每根预装柱中添加2ml培养基中包含1-2 x 108个活细胞。打开旋塞阀，排出培养基，直到细胞完全进入预装柱中。关闭旋塞阀。
6.     在预装柱的顶部注入新鲜的2ml培养基，使培养基进入预装柱中。关闭旋塞阀。
7.     向预装柱中再添加2-5ml的培养基，以确保羊毛顶部被培养基覆盖。
8.     在37°C下孵育1小时。
9.     通过两次洗涤收集未粘附的T细胞。不要推柱塞！
10.   收集粘性的B细胞时，可以添加培养基直至充满柱子，轻敲柱子使细胞脱离尼龙毛。推柱塞，并重复两次
11.   在1200 rpm下离心10分钟收集细胞，并弃去上清液。
12.   将细胞沉淀重悬于大约10ml所需的培养基中

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上海曼博生物医药科技有限公司
MineBio Life Sciences Ltd.
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