产品详情
文献和实验
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库存 :大量
英文名 :Brucella.melitensis
保质期 :一年
供应商 :上海钰博生物科技有限公司
保存条件 : -20℃保存
规格 :50次
羊布氏杆菌PCR试剂盒
Brucella.melitensis
产品简介:Brucella.melitensis
布氏杆菌是一类革兰氏阴性的短小杆菌,牛、羊、猪等动物最易感染,引 起母畜传染性流产。人类接触带菌动物或食用病畜及其乳制品,均可被感染。 羊布氏杆菌病是羊的一种慢性传染病。主要侵害生殖系统。羊感染后,以母羊 发生流产和公羊发生睾丸炎为特征。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的 试剂盒,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增羊布氏杆菌,与其他微生物没有交 叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
规格及成分:
成 份 | 编号 | 十孔盒包装 |
PCR MagicMix 3.0 | 90805 | 1 mL(红盖) |
超纯水 | 100935 | 1 mL(亮黄色) |
羊布氏杆菌PCR 引物混合液 | 13-67400yw | 100 μL(白盖) |
羊布氏杆菌PCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL) | 60908-67400pc | 50 μL(黄盖) |
天净沙核酸释放剂(试用装) | 61202 | 20 次(1mL、绿盖) |
使用手册 | 13-67400sc | 1份 |
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
自备试剂:
样本DNA。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次天净沙核酸释放剂试用装,其使用 手册可以从本公司网站天净沙核酸释放剂或产品编号 61202 下载。
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要 求的样品起始量)中加 10μL 羊布氏杆菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释 液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 |
样品管 N+2 个 |
PCR 阴性对照 |
PCR 阳性对照 |
PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
羊布氏杆菌PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | - | - |
PCR 阴性对照((超纯水) | - | 18 μL | - |
PCR 阳性对照(羊布氏杆菌PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液) | - |
- |
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应:
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 (35 个循环) |
95℃ | 30sec |
55℃ | 30sec | |
72℃ | 20 sec | |
最后延伸 | 72℃ | 7 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物阳性对照必须有 300bp 条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实 验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
上海钰博生物科技有限公司
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