支原体通用PCR试剂盒

库存 ：大量

英文名 ：Mycoplasma spp.

保质期 ：一年

供应商 ：上海钰博生物科技有限公司

保存条件 ： -20℃保存

规格 ：50次

产品简介：
支原体和亲缘关系很近的无胆甾原体等统称霉形体。霉形体是目前发现的最 小的、最简单的原核生物。它们缺乏细胞壁、有变形能力、能通过滤菌器、可 在无生命培养基中生长繁殖，成为细胞培养中常见的一种污染源，严重影响细 胞生长率、细胞形态、基因表达、细胞代谢和细胞活力。因此，对以支原体为 主的霉形体进行早期检测非常重要，它能使得研究人员在污染扩散前快速采取 有效措施，减低损失。本试剂盒是根据 PCR 原理开发，具有下列特点：
1. 免 DNA 制备，直接用裂解液做 PCR，更加简单快捷。
2. 覆盖广，根据 16S rDNA 保守区设计引物，能检测 40 余种霉形体（包括欧盟药典要求检测的 9 种支原体）。
3. 特异性高，跟梭状芽孢杆菌、链球菌和乳酸杆菌等亲缘关系相近的微生物无交叉反应。
4. 灵敏高，可检测低至几个拷贝/反应的支原体污染。
5. 提供内参和无感染性的支原体阳性对照（DNA 片段），能有效避免实验结果的假阳性和假阴性。
6. 可用于培养细胞、疫苗、血清、重组蛋白和耗材的污染检测。但不能用于临床诊断。
7. 本产品足够至少 50 次 40 μL 体系 PCR 检测(含阳性对照和阴性对照反应)。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
支原体通用PCR 引物混合液	13-74000yw	100 μL（白盖）
支原体通用PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	13-74000pc	50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂（试用装）	61202	20 次（1mL、绿盖）
使用手册	13-74000sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样， 以此作为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试 剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的天净沙核酸释放剂，本产品的裂解液可 以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
支原体通用PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（超纯水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（支原体通用PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30sec
	55℃	30sec
	72℃	60 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 442bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。