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文献和实验
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库存 :大量
英文名 :Escherichia coli PCR Kit
保质期 :一年
供应商 :上海钰博生物科技有限公司
保存条件 : -20℃保存
规格 :50次
大肠杆菌通用 PCR 试剂盒
Escherichia coli PCR Kit
产品简介:
Escherichia coli PCR Kit
大肠杆菌(Escherichia coli)为埃希氏菌属(Escherichia)代表菌。一 般多不致病,为人和动物肠道中的常居菌,在一定条件下可引起肠道外感染。 但某些血清型菌株的致病性强,引起腹泻,统称致病性大肠杆菌,又叫致泻 性大肠杆菌(Diarrheagenic Escherichia coli,DEC)根据致病性的不同, 这些致泻性大肠埃希菌被分为五种。检测致病性和非致病性大肠杆菌是食品 行业(包括饮用水)的一个重要的安全指标,因此快速检测致病性和非致病 性大肠杆菌具有重要意义。本产品是根据 PCR 原理开发的大肠杆菌通用检测 试剂盒,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩大肠杆菌,与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
规格及成分:
成 份 | 编号 | 十孔盒包装 |
PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL(红盖) |
超纯水 | 试剂二 | 1 mL(亮黄色) |
大肠杆菌通用(含致病性和非致病性)PCR 引物混合液 | 试剂三 | 100 μL(白盖) |
大肠杆菌通用(含致病性和非致病性)PCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL) | 试剂四 | 50 μL(黄盖) |
使用手册 | ZY-99047 | 1份 |
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
自备试剂:
样本DNA。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是大肠杆菌通用(含致病性和非致病性)PCR 阳性对照的1000 倍稀释液,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 |
样品管 N+2 个 |
PCR 阴性对照 |
PCR 阳性对照 |
PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
大肠杆菌通用(含致病性和非致病性)PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | - | - |
PCR 阴性对照(水) | - | 18 μL | - |
PCR 阳性对照(大肠杆菌通用(含致病性和非致病性)PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液) | - |
- |
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应:
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 (35 个循环) |
95℃ | 15 sec |
57℃ | 15 sec | |
72℃ | 40 sec | |
最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。 对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
上海钰博生物科技有限公司
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