钩端螺旋体通用PCR试剂盒

库存 ：大量

英文名 ：Leptospira spp.

保质期 ：一年

供应商 ：上海钰博生物科技有限公司

保存条件 ： -20℃保存

规格 ：50次

产品简介：
钩端螺旋体(Leptospira)简称钩体，种类很多，可分为致病性钩体及非致病 性钩体两大类。致病性钩体能引起人及动物的钩端螺旋体病，简称钩体病， 是在世界各地都广泛流行的一种人畜共患者，中国绝大多数地区都有不同程 度的流行，尤以南方各省最为严重，对人民健康危害很大，是中国重点防治 的传染病之一。本产品是根据 PCR 原理开发的钩端螺旋体的通用检测试剂 盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩钩端螺旋体，与其他病原没有交叉反 应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	试剂一	1 mL（红盖）
超纯水	试剂二	1 mL（亮黄色）
钩端螺旋体通用PCR 引物混合液	试剂三	100 μL（白盖）
钩端螺旋体通用PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	试剂四	50 μL（黄盖）
使用手册	ZY-99047	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是钩端螺旋体通用PCR 阳性对照的1000 倍稀释液，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
钩端螺旋体通用PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（钩端螺旋体通用PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	15 sec
	57℃	15 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。  对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。