研选彗星检测试剂盒（DNA损伤检测试剂盒）

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产品详情

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库存：10

英文名：彗星检测试剂盒

保质期：6个月

供应商：无锡菩禾生物医药技术有限公司

保存条件：2-4°

规格：24T/12T/48T

本试剂盒具有以下特点：

采用单层凝胶体系，操作简便；
载玻片表面经过特殊处理，粘附力强，有效降低脱胶风险；
搭配直径12mm盖玻片，增加单个载玻片的实验通量；
凝胶经70%酒精脱水烘干后染色，有效解决镜检时不易聚焦的问题。

产品编号：CTCC-M001
包装规格：6T/12T/24T/48T
产品简介
当各种内外源DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时，DNA的超螺旋结构受到破坏，采用化学方法使细胞膜、核膜破裂，细胞内的蛋白质、RNA以及其它成分均扩散到细胞裂解液中，而核DNA由于分子量太大只能留在原位。在碱处理和碱性电解质的作用下，DNA发生解螺旋，损伤的DNA断链及片段被释放出来，在电泳过程中会离开核DNA向阳极移动，形成彗星状的图像，而未损伤的DNA部分保持球形。DNA受损越严重，产生的断片越多并且片段越小，电泳时迁移的DNA量也就越大，荧光显微镜下可观察到尾部荧光强度增强。
试剂盒组成

组分	12T	24T	48T
Comet Agarose	8mL	15mL	15mL×2
Lysis Solution	50mL	100mL	100mL×2
Comet Slide	2	4	8
10×Alkaline Solution	125mL	250mL	250mL×2
Propidium Iodide(PI)	1mL×2	4mL	4mL×2

保存：PI染色液需 4℃避光保存，其余试剂室温保存即可，有效期6个月。
注意事项

本产品仅限于科学研究使用。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
载玻片与盖玻片均为特殊耗材，不可自行替换，不可擦拭，不可重复使用，否则脱胶风险显著增加。
为避免操作不当引起脱胶，勿将溶液直接倾倒在玻片上，需将载玻片轻柔浸没在溶液中。
除沥去液体时，应始终保持玻片水平放置。

试剂制备

自备试剂：1×PBS缓冲液(不含钙镁离子)、去离子水、无水乙醇、DMSO(可选)。
拧松Comet Agarose试剂盖，90-100℃水浴使凝胶完全熔化(不建议微波加热，需至少水浴5min)，转移至37℃水浴锅中放置备用(需至少平衡20min后方可使用)。
Lysis Solution使用前需4℃预冷至少20min，若长期保存，室温即可，4℃长期放置会有沉淀析出。(选做)对于富含亚铁血红素的样本(如血细胞、组织样本等)，Lysis Solution需额外添加10%DMSO(如45mL Lysis Solution+5mL DMSO)。
解旋液配制：将10×Alkaline Solution用去离子水稀释后(如5mL 10×Alkaline Solution +45mL 去离子水)，室温放置备用。
电泳液配制：将10×Alkaline Solution用去离子水稀释后(如50mL 10×Alkaline Solution +450mL 去离子水)，4℃冷藏备用(预冷时间应不小于4h)。

操作说明（示意图见尾页）

样本处理：用冷的1×PBS缓冲液(不含钙镁)重悬细胞，调整细胞密度为3×10⁵个/mL。
铺胶：按照1:10(v/v)将细胞悬液与熔化后的Comet Agarose(37℃)在EP管中充分混合(如10μL 细胞悬液+100μL Comet Agarose)，迅速吸取30μL混合液(约900个细胞)滴加至载玻片表面，立即加盖盖玻片，凝胶自动延展，转移载玻片至干燥的容器中水平放置，4℃避光固化30min。注意：每次点样均应使用新的移液器吸头，且待测样本较多时应逐个进行混样、点样，不可同时混样。
裂解：用指腹小心将盖玻片推开，可见光滑平整的圆形单层凝胶。将载玻片轻柔浸入装有4℃预冷的Lysis Solution的容器中水平放置，4℃裂解1h-2h(可自行摸索样本最佳裂解时间，最长至4℃裂解过夜)。
洗涤：取出载玻片，并沥去多余液体。放入装有蒸馏水的水平容器中浸洗2次，每次放5min。
解旋：取出载玻片，并沥去多余液体。水平容器中倒入适量新鲜配制的解旋液，将载玻片轻柔浸没其中，室温避光解旋20min。
电泳：水平电泳仪中倒入4℃充分预冷的电泳液(预冷时间不小于4h)，书写区朝向负极，将载玻片轻柔浸入电泳液中。按照1V/cm设定电压(如正负极水平间距25cm，即设置电压为25V)，调节电泳液液面高度使电流接近300mA，电泳15-30min。注意：电泳时间延长会导致电泳液温度持续升高，可通过在电泳仪四周放置冰袋来控制电泳温度，避免高温导致凝胶脱片。
中和：取出载玻片，并沥去多余液体。放入装有蒸馏水的水平容器中浸洗2次，每次5min。
烘干：取出载玻片，并沥去多余液体，将载玻片轻柔浸没70%酒精溶液中，室温放置5min，取出沥干，37℃烘干15min至凝胶完全干燥。
染色：每个样本滴加150μL染色液，室温避光染色10min，沥去染色液，蒸馏水浸洗2次，每次10min。
观察及分析：荧光显微镜下观察，并进行图片采集。图片采集时应保持凝胶湿润。可使用彗星分析软件(如CASP，https://casplab.com/)，得出彗星尾长 (tail length of comet，TL)、彗星DNA比例(percent DNA in the tail，TD)、彗星尾距(tail moment，TM)等参数。DNA 损伤按慧星尾部 DNA 量占全部 DNA 量的比例可分为 5 级：0 级：＜ 5% 无损伤；1 级： 5 ～20% 轻度损伤；2 级： 20～40% 中度损伤；3 级： 40～95% 高度损伤；4 级：＞ 95% 重度损伤。

示例:

操作示意图:

人鼠定制原代细胞

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干细胞诱导检测试剂盒（茜素红S染色试剂盒-成骨、ALP染色试剂盒-成骨、油红O染色试剂盒-成脂、TRAP染色试剂盒-破骨、F-actin染色试剂盒-破骨）

细胞培养类产品

仪器类（小型三气细胞培养箱、动物培养箱、低/厌氧工作站）

无锡菩禾生物技术有限公司（简称“菩禾”）成立于2013年，位于无锡国家生物产业基地---百桥生物科技园，是一家集成细胞生产、应用的高新技术企业。专注于为药企、各类科研机构及CRO企业提供符合标准规范的细胞资源、细胞培养基、细胞检测试剂盒和细胞培养设备。公司还建有完善的细胞建系、细胞筛选、细胞建库、细胞检测等技术服务体系。目前建有的技术平台有细胞生物学测试平台、原代细胞分离平台、动物实验平台、免疫学平台及分子生物学平台。