甲基化检测BSP

服务介绍：

　　亚硫酸氢盐处理后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法是检测基因甲基化的经典方法，其原理为：用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被转化为尿嘧啶(U)，而甲基化的胞嘧啶则不变。随后设计BSP引物进行PCR，在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶。最后，将PCR产物克隆至载体后进行测序，测序结果与未经处理的序列比较，分析CpG位点是否发生甲基化，这种方法称为BSP-克隆测序法。此方法精确度高，能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态。一般选取10个克隆子的测序结果进行数据分析。

甲基化特异性的PCR是一种灵敏度高且操作相对简单的甲基化研究方法。重亚硫酸盐处理DNA后，基因组DNA发生的由甲基化状态决定的序列改变。随后进行引物特异性的PCR。该方法引物设计是关键。MSP中设计两对引物，即一对结合处理后的甲基化DNA链（引物对M），另一对结合处理后的非甲基化DNA链（引物对U）。检测MSP扩增产物，如果用引物M能扩增出片段，则说明检测位点存在甲基化；若用引物U扩增出片段，则说明被检测的位点不存在甲基化。

该方法优点是：检测灵敏度高，样品消耗少，仅需1μg的基因组DNA，可用于石蜡包埋样本；快速、简单，省时。
 

实验流程：

　　取材- DNA提取-亚硫酸氢盐处理-纯化DNA-PCR扩增-TA克隆-测序-发报告

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　　送样运输要求：

动物组织：100 mg(黄豆大小)，最少50 mg(绿豆大小)，脂肪组织，结缔组织，纤维化组织适当增加，干冰运输。

　　细胞：1×10^6个细胞，贴壁细胞舒展，未变圆，干冰运输。

全血：最少1 mL新鲜血液EDTA抗凝管，4度运输。

DNA：体积≥50 uL，浓度≥ 50 ng/ul，干冰运输。

 

广州华腾生物医药科技有限公司提供以动物体内实验、药理药效非临床评价为核心的技术服务。公司的核心团队成员由药理毒理学、实验动物学、生物材料专业人员组成，可提供全方位的体内和体外非临床评价，以支持项目的 IND 注册。我们公司坚持以客户为中心，按照 CFDA 和 FDA 非临床研究技术指导原则制定综合解决方案来加速研发进程，节约研发成本。