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文献和实验
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保存条件 :4度
保质期 :一年
英文名 ://
库存 :大量
供应商 :普利莱
CAS号 ://
规格 :100ml/500ml
NP-40裂解液 C1057描述:
NP-40 裂解液是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation,IP)、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。
本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细菌样品。
NP-40 裂解液的主要成分为 Tris(pH7.4),NaCl,1% NP-40,EDTA 以及磷酸酶抑制剂。
用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用普利莱P1511 BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
储存:
4℃保存,12 个月有效
制备细胞裂解产物:
- 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞,而后用预冷的PBS洗涤细胞两次。估计细胞离心后的体积(PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV);
- 每50~100 ml PCV加入5倍体积裂解液(250~500 ml),涡旋震荡10秒,冰浴放置20分钟;
- 12000g 4℃离心15分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物。
- 取50-100 mg组织在冰上剪成碎片,用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS;
- 按照每20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当
- 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次,直到95%的细胞被破碎,涡旋震荡10秒,冰浴放置20分钟;
- 12000g 4℃离心15分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物,可用于后续的免疫沉淀或者Western Blot等实验。
- 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物;
- 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取,以避免某些不稳定蛋白的降解;
- 在该裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂,用户可自行选择进行添加。
北京普利莱(APPLYGEN)基因技术有限公司
品牌商实名认证
钻石会员
入驻年限:13年