UniSil® HILIC 亲水硅胶填料

库存 ：9999

供应商 ：纳微科技

现货状态 ：有

保修期 ：联系商家

规格 ：详情请联系商家

UniSil®系列HILIC硅胶填料具有优良的包括分配作用等多种模式亲水相互作用色谱分离效果，允许使用含高达60%水相的流动相，特别适用于常规反相色谱难以保留的强极性或亲水化合物的HPLC分析以及制备纯化，尤其是对强极性碱性化合物的保留能力增强，无需使用己烷和氯仿等有毒溶剂，纳微开发的HILIC色谱填料具有高柱效、良好选择性、高机械强度，高化学稳定性和更长的使用寿命，与反相色谱填料具有极强的互补性。

 

纳微科技可提供多种HILIC填料，包括非键合硅胶，氰基、氨基、二醇基、酰胺基、双氨基和咪唑啉类键合相硅胶。另外，纳微还可为客户定制特种的HILIC色谱填料，以满足特殊的应用需求。纳微科技还可以提供聚合物为基质的HILIC色谱填料，以满足强酸碱分离条件的要求。


纯化操作步骤

层析柱装填（推荐动态轴向压缩柱装柱法） 匀浆液的浓度是指填料沉降至体积恒定后的体积 比上匀浆液的总体积。为了取得最佳的装柱效果，我们 推荐异丙醇为匀浆溶剂，匀浆液浓度为 50~60 %。



图 1. UniSil® HILIC 硅胶色谱填料产品图


具体装柱方法如下：

1）首先计算所装色谱柱的柱体积 Vc*，然后计算该体 积所需填料的质量 m，按照下列公式计算： Vc = h × πr 2； m =ρ ×Vc

*Vc：色谱柱柱体积；h：色谱柱高度；r：色谱柱半径；ρ：填 料堆积密度。为获得紧密的柱床，推荐填料的质量过量，一般 为所需填料 m 的 1.05~1.10 倍。

2）准备好色谱柱，总的柱体积应该足够把匀浆液一次 倒入。

3）使用洗瓶或倒流的方法将色谱柱底部的筛板用匀 浆液溶剂润湿，并关掉色谱柱出液口阀门，在色谱柱 底部保留 1~2 cm 高的液体。

4）重新搅动匀浆液，确保其分散均匀。

5）把匀浆液慢慢的倒入色谱柱中，防止混入气体。

6）待匀浆液完全转移到色谱柱，用装有匀浆液溶剂的 洗瓶冲洗色谱柱内壁。

7）对于粒径 10 μm 的硅胶填料推荐设定 80~100 Bar 的压力来装填动态轴向压缩柱。


柱子的使用注意事项

纳微科技提供的HILIC柱中的液相是含90 % (v/v) yi.腈的醋酸铵(10 mM，pH=6.8)溶液。在储存和运输过 程中，硅胶填料可能会干涸。这时推荐用 10-20 倍柱体积的纯有机溶剂如甲醇、yi.腈等进行冲洗以活化色谱 柱。接着可使用用户自己选择的流动相冲洗色谱柱。流 速升至所需的操作条件，直至基线稳定为止。溶剂替换 时请使用正常操作流速的一半。

HILIC 柱通常在高压下运行，如果管路连接不紧， 将会导致有机溶剂和注入样品的泄漏，从而对操作人 员的健康产生影响。一旦发生泄漏，应佩戴适当的手套 进行处理。另外当打开色谱柱时还应采取适当的保护 措施，以防止微小的硅胶颗粒进入呼吸道。

注：如果使用了含甲酸盐的流动相（如甲酸铵、甲酸等）并把缓冲 盐冲洗掉后，在再次安装色谱柱和使用含甲酸盐流动相运行时需要稍长 一些的时间进行平衡。注意溶剂组分的剧烈改变和频繁的溶剂替换可能 导致色谱柱寿命的缩短。


样品与流动相

为了避免色谱柱的堵塞，所有样品和溶剂，包括缓 冲溶液在内，都必须在使用前用 0.45 μm 或 0.2 μm 的 滤膜过滤。样品溶剂需要含 60-100 %有机溶剂或为初 始洗脱液组成。水的比例应被最小化，使用弱亲水作用 溶剂如yi腈。推荐使用 5 %的水作为自动进样器的清 洗液。用于 HILIC 的相对溶剂强度为：丙,酮<异 丙醇<乙醇<甲醇<水。

适用于 HILIC 分离的缓冲盐体系为甲酸盐和醋酸 盐，因为它们在很高比例的有机溶剂中也有很好的溶 解性。避免使用磷酸盐以及其它低溶解性缓冲盐，以防 止在柱床产生沉淀。对于大多数分析样品，推荐的缓冲 盐浓度为 5-20 mM，根据在洗脱液中溶解度的不同， 上限为 200-300 mM。避免使用 TFA 和其它离子对试 剂，因为它们会干扰 HILIC 分离机理，并抑制 MS 信 号。

在通常的 HILIC 应用中，一般使用含 50-95 %浓度yi-腈的水溶性缓冲盐（如甲酸铵、醋酸铵或它们的 酸，在有机相中具有很高的溶解性）。HILIC 色谱柱可 在 pH=1.5 ~ 8 范围内操作，避免使用强碱和氢.氧.化钠 进行清洗。为了获得更佳的分离效果和延长柱的使用 寿命，请尽量使用 pH 在 2~7.5 范围内的流动相。

如果对柱子并不熟悉，推荐的起始和平衡程序为 从 90 %（v/v）yi-腈/10 %（v/v）缓冲液（如 10 mM 醋 酸铵）到 40%（v/v）yi-腈的梯度。一开始请使用相对 较低的流速以确保获得更好的分离效率。

流动相在使用前需要脱气。一个简单的脱气方法 是将流动相在由水泵形成的真空下超声 5 min。


再生

如果压力突然增加，预示色谱柱入口端的筛板发 生了堵塞。在这种情况下，建议将色谱柱反接后用适宜 的溶剂进行冲洗。如果柱压升高或选择性发生变化，请 使用yi-腈/水（50:50，v/v）来清洗去除极性污染物。如 果该冲洗程序并不能解决问题，则使用yi腈/水（95:5， v/v）进行清洗。


储存

色谱填料长期不使用时，应清洗干净并干燥好，使 用密封性能好的袋子或者桶装好，置于通风干燥的常 温环境中保存，保质期为 5 年。色谱柱储藏长期不用 时，请将色谱柱保存在yi-腈/水（95:5，v/v）中，为了 防止柱床干涸，请用堵头塞紧色谱柱的两端。

 

纳微科技UniSil® HILIC硅胶填料产品及相关参数

 

 

故障排除

纳微科技的硅胶色谱填料可以耐受多次装柱和拆卸：拆卸时，将一个足够大的容器放在柱底部，打开 柱底塞，放出浆液，用容器收集浆液，或移走柱顶部 的液体分配器，向层析柱中加入足够量的流动相，轻 轻搅拌使得柱内填料成浆液，悬浮的浆液可以用虹吸 管抽至合适的容器中。另有两个事项需要注意：任何 进入色谱柱的溶液均要经过 0.45 µm 滤膜过滤；任何 时候都不要用硝酸来清洗纳微科技的色谱填料产品。 具体请参考下表：


1、柱压升高

原因分析	建议措施
流速过高	降低流速
泵和收集器之间的阀门未打开	打开阀门
仪器在线过滤器堵塞	拆 掉 过 滤 器 并 清 洗，可能的话替换 过滤器；在使用前 过滤样品和洗脱液
柱前堵塞	使用 20 BV 流动相 反冲色谱柱
部分样品或杂质未清洗干净	执行清洗操作
样品在柱子上发生沉淀	遵循清洗步骤，调 节洗脱液来维持样 品
溶解度 柱床被压缩	重新装填柱子
色谱柱使用时间过长	更换色谱柱或更换色谱填料
使用 pH 超出正常范围	清洗后若柱压无法 恢复则建议更换色 谱柱或色谱填料

2、样品在梯度洗脱前被洗脱

原因分析	建议措施 样
品溶液中离子强度 太高	降低样品溶液的离子强度， 如采用稀释或脱盐等手段
pH 不合适	调节 pH 增加结合强度
随着上样次数的增加， 部分样品或杂质未清 洗干净	执行清洗操作

 3、样品在洗脱过程中不被洗脱

原因分析	建议措施
洗脱液的离子强度过低	增加洗脱液的浓度
洗脱液的洗脱能力过低	更换洗脱能力更强的洗脱液
洗脱液的 pH 不合适	调整洗脱液的 pH

4、分辨率降低

原因分析	建议措施
不合适的洗脱条件，如 梯度过陡或流速过高	改变洗脱条件，采用较缓的梯 度洗脱或等度洗脱，降低流检查柱效
柱子未装填好	检查柱效，重新装柱速
在柱子顶端或柱后有大 部分的混合空间	加高填料的上表面或减少柱 子后体积
柱子过载	清洗并重新平衡色谱柱，降低 上样量
部分样品或杂质未清洗 干净	执行清洗操作
粒径较大	更换同种类型粒径更小的填 料
选择性差	增加或调解离子对试剂或更 换其他类型填料
由于表面的硅烷醇导致 混合模式滞留	降低 pH 抑制硅烷醇或更换柱 子

 

5、柱床中有气泡

原因分析	建议措施
洗脱液没有脱气	将缓冲液充分脱气
流动相在混合后产生 气泡	如果可能的话，线下将流动 相混合后脱气，然后等度洗 脱
柱子未装填好	重新装柱

6、基线漂移

原因分析	建议措施
色谱柱未平衡好	增加平衡时间
洗脱液 A，B 在同一紫 外波长下吸收系数不同	使用不同的波长或走空白梯 度
洗脱液不纯	使用高纯度的色谱纯级试剂

7、出现鬼峰

原因分析	建议措施
前一个样品的不完全洗脱	再生
洗脱液不纯	运行空白对照或使用高纯 度的色谱纯级试剂
洗脱液本身的吸收	运行空白对照，或更换没 有紫外吸收的洗脱液
痕量离子性杂质结合 在色谱柱上，在平衡和 上样过程中被浓缩，洗 脱时出峰	清洗色谱柱