文献支持免疫沉淀（ip）、免疫共沉淀（coip）| 蛋白质免疫沉淀、蛋白质免疫共沉淀（IP/CO-IP）

提供商 ：武汉金开瑞生物工程有限公司

服务名称 ：免疫沉淀（IP/CO-IP）

规格 ：视具体情况而定，详情请咨询

服

服务简介

免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）是利用抗原抗体特异性反应纯化富集样品中目的蛋白的一种方法。通常使目标蛋白同抗体-protein A/G形成免疫复合物沉淀而得以收集，然后通过WB检测目的蛋白。

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CO-IP）是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法，通过抗体和已知蛋白结合，从而捕获整个已知蛋白复合物，进而研究复合物中与已知蛋白存在相互作用的蛋白。

 

服务流程

接收订单及样品--样品裂解液制备、定量--样品、抗体、protein A/G-凝胶孵育--沉淀收集、洗涤、制样--WB检测--结果交付

客户提供

1、需检测的样品，一抗（也可以选择由金开瑞提供）。

2、送样要求：

▶ 离体后迅速超低温处理并-80℃冻存的组织样品，干冰运输；

▶ 组织：动物组织不少于400 mg；植物组织不少于2 g；

▶ 细胞：2x10^7个细胞。

 

最终交付

WB胶片/照片及实验报告。

 

服务说明

服务项目	细分	服务周期（工作日）
免疫沉淀	IP+WB	15-20
免疫共沉淀	（CO-IP）+2*WB	请咨询
免疫共沉淀-质谱鉴定	CO-IP+WB+MS

 

案例展示

标签融合蛋白表达并免疫共沉淀，质谱鉴定寻找互作蛋白（转染293T细胞）

细胞核蛋白免疫共沉淀，WB验证蛋白互作

相关技术服务

● 双荧光素酶报告系统          ● 酵母双杂交            ● EMSA

● RNA pull-down                ● RIP-qPCR             ● DNA pull-down

● ChIP-qPCR                       ● 酵母单杂交            ● CUT&Tag

 

相关资源

1、Co-IP的实验步骤

    ● 细胞提取：从细胞或组织中提取蛋白质，可以使用细胞裂解缓冲液来破裂细胞膜，并添加蛋白酶抑制剂和磷酸酯酶抑制剂来保护蛋白质的完整性。

    ● 抗体固定：将目标蛋白质的抗体与磁珠或琼脂糖小球等固相材料结合，形成抗体固定的材料。

    ● 免疫沉淀：将细胞提取物与抗体固定的材料一起孵育，使目标蛋白质与其结合伙伴形成复合物。

    ● 洗涤：将反应混合物进行多次洗涤，以去除非特异性结合的蛋白质和杂质。

    ● 洗脱：通过改变pH、离子强度或添加竞争剂等方式，将复合物从抗体固定材料上洗脱下来。

    ● 蛋白质分析：对洗脱的样品进行蛋白质分析，可以使用SDS-PAGE和免疫印迹等技术检测目标蛋白质及其结合伙伴的存在。

 

2、Co-IP的应用场景

    ● 揭示蛋白质复合物的组成和功能：Co-IP技术可以用于鉴定蛋白质复合物的组成和结构。通过选择特定的目标蛋白质作为抗体的靶点，可以将其与其他相互作用蛋白质共沉淀，从而确定蛋白质复合物的组成。这有助于理解蛋白质复合物在细胞内的功能、相互作用网络和信号传导通路。

    ● 研究信号传导和基因调控：Co-IP技术可用于研究蛋白质在信号传导和基因调控中的相互作用。例如，可以通过共沉淀实验来确定转录因子与DNA序列的结合，并揭示基因调控的机制。此外，Co-IP还可用于研究蛋白质激酶和底物之间的相互作用，从而了解细胞信号传导通路的调控机制。

    ● 鉴定疾病相关的蛋白质复合物：Co-IP技术可用于鉴定与疾病相关的蛋白质复合物。通过将目标蛋白质与疾病相关的样本共沉淀，可以发现与疾病发生和发展相关的蛋白质相互作用。这有助于理解疾病的发病机制、寻找潜在的治疗靶点，并为药物开发和治疗策略提供重要的线索。

    ● 蛋白质交互作用网络分析：通过大规模的Co-IP实验和蛋白质组学技术结合，可以构建蛋白质交互作用网络图谱。这些网络图谱提供了蛋白质相互作用网络的全貌，有助于了解细胞内蛋白质相互作用网络的结构和功能。这对于研究细胞过程、生物学调控和疾病机制等具有重要的意义。

 

3、与Co-IP技术相关的常见问题与解答

(1)    Co-IP实验中如何选择合适的抗体？

    ▶ 选择具有高亲和力和特异性的抗体，最好是经过验证的商业抗体或有良好文献支持的自制抗体。

    ▶ 针对目标蛋白质选择不同的克隆，进行抗体特异性验证，如Western blotting。

    ▶ 进行预实验，评估抗体的适用性和效果。

 

(2)    如何优化Co-IP实验条件以提高效率和特异性？

    ▶ 优化提取和溶解条件，使用合适的缓冲液和洗涤液来提高蛋白质的溶解和纯化效率。

    ▶ 调整孵育时间和温度，以优化抗体与靶蛋白质的结合。

    ▶ 增加洗涤步骤，以去除非特异性结合的蛋白质。

    ▶ 使用阻断剂，如牛血清蛋白（BSA）或鱼精蛋白（Gelatin），减少非特异性结合。

 

(3)    如何解释Co-IP实验结果中的负面数据或低信号？

    ▶ 检查实验条件和步骤是否正确，如蛋白质提取、溶解、抗体结合等。

    ▶ 评估抗体的质量和特异性，进行抗体验证实验，如Western blotting。

    ▶ 重新评估目标蛋白质的表达水平，确定其是否充分表达。

    ▶ 检查Co-IP实验条件是否适当，可能需要调整抗体浓度、孵育时间等。