转基因元件SSU启动子探针法qPCR试剂盒

转基因元件SSU启动子探针法qPCR试剂盒

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转基因元件SSU启动子探针法qPCR试剂盒原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
  PCR反应的特异性决定因素为:
  ①引物与模板DNA特异正确的结合;
  ②碱基配对原则;
  ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
  ④靶基因的特异性与保守性。

大鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)免疫试剂盒    GAPDH    3-磷酸甘油醛脱氢酶(兔来源免疫组化用抗体)
大鼠甲羟戊酸5-焦磷酸脱羧酶(MDD)免疫试剂盒    GAPDH(3E12)-Loading Control    3-磷酸甘油醛脱氢酶单克隆抗体(内参抗体)
大鼠极低密度脂蛋白(VLDL)免疫试剂盒    GAS2L1    生长停滞特异性蛋白2家族1抗体
大鼠激肽原(KNG)免疫试剂盒    GPR97     G蛋白偶联受体97抗体
大鼠激动异构酶/细胞分裂素MB(CKMB)免疫试剂盒    GBP7    G蛋白结合蛋白7抗体
大鼠基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)免疫试剂盒    GFP    绿色荧光蛋白抗体
大鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)免疫试剂盒    GFP    绿色荧光蛋白抗体
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)免疫试剂盒    GPS1    G蛋白通路抑制蛋白1抗体
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)免疫试剂盒    GDNF Receptor alpha 2    胶质细胞系源性神经营养因子受体α2抗体
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)免疫试剂盒    gamma Synuclein    核突触蛋白-γ抗体
大鼠基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B) 免疫试剂盒    GM-CSF    粒细胞-巨噬细胞克隆刺激因子抗体
大鼠基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8/Collagenase II)免疫试剂盒    GLUR/glutathione reductase    谷胱甘肽还原酶抗体
大鼠基质金属蛋白酶7(MMP-7)免疫试剂盒    GLP-1    胰高血糖素样肽-1抗体
大鼠基质金属蛋白酶5(MMP-5)免疫试剂盒    Granulin    颗粒蛋白前体抗体
大鼠基质金属蛋白酶4(MMP-4)免疫试剂盒    Glypican 1    磷脂酰基醇蛋白聚糖1抗体
大鼠基质金属蛋白酶3(MMP-3)免疫试剂盒    GSK3 alpha    糖原合酶激酶3α抗体
大鼠基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)免疫试剂盒    Gentamicin(3G7)    庆大霉素单克隆抗体
大鼠基质金属蛋白酶14(MMP-14)免疫试剂盒    GSTO1    谷胱甘肽硫转移酶ω1抗体
大鼠基质金属蛋白酶13(MMP-13)免疫试剂盒    GJB3    间隙连接蛋白31抗体
大鼠基质金属蛋白酶10(MMP-10)免疫试剂盒    GNMT    甘氨酸-N-甲基转移酶
大鼠基质金属蛋白酶1(MMP-1/Collagenase I)免疫试剂盒    GRP75    G蛋白偶联受体75抗体
大鼠肌质网膜钙ATP酶(SERCA)免疫试剂盒    GATA4    GATA结合蛋白4抗体
大鼠肌酸激酶同工酶MM(CK-MM)免疫试剂盒    GABA    兔抗γ1氨基丁酸抗体
大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)免疫试剂盒    GPR85    G蛋白偶联受体GPR85蛋白抗体
大鼠肌酸激酶同工酶BB(CK-BB)免疫试剂盒    Gentamicin    庆大霉素抗体产品特点:
灵敏度高:可检测个位拷贝数的基因
特异性高:有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高:复孔间差异小,实验结果重复性强
扩增性能优:扩增效率高,荧光信号强
检测特异性与灵敏度:
高性能的UNICONTM Taq热启动酶及组分优化的反应体系保证高度的特异性扩增,提升了扩增效率,使得UNICONTM qPCR Master Mix具有极高的检测灵敏度。以人293T细胞cDNA为模板,在相同条件下扩增低拷贝hbcl6基因,与同类产品相比,UNICONTM qPCR Master Mix具有更好的扩增特异性、更高的扩增效率及更好的复孔重复性,检测灵敏度更高。
转基因元件SSU启动子探针法qPCR试剂盒检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

PCR实验步骤:
  ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。
  ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
  ③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。
此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
  ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
  ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
  ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,
获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定   先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。

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